[发明专利]一种辅助鉴定具有绿子叶性状大豆的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种辅助鉴定具有绿子叶性状大豆的方法。

背景技术

大豆[Glycine max（L.）Merr.]作为世界上最重要的经济作物之一，是人类蛋白质和脂肪的重要来源，在食品、饲料、工业上具有广泛的用途。大豆种子的子叶颜色分为黄、绿两色。我国大豆种质资源丰富，但是具有绿子叶性状的大豆种质资源较少，仅占2.77%。随着经济水平的提高，膳食结构的调整，人们对大豆的需求正逐步趋向多元化、多用途的方向发展，绿子叶大豆以其独特的外观品质及特殊的食用、加工特性正逐步受到人们的关注及加工企业的青睐。因此，加快绿子叶大豆种质资源的利用和新品种的选育，成为大豆遗传育种工作中的重要研究内容之一。

常规育种是通过性状的表现型间接对基因型进行选择，这种选择方法虽然可行，但是由于目的基因位点有纯合和杂合之分，需要多年自交鉴别，故育种年限较长。近年来，随着分子标记技术的发展，分子标记辅助育种和分子设计育种等现代育种技术应运而生，使人们能够直接对基因型进行选择，选择结果更加客观、准确，大大提高育种的效率和缩短育种的年限。因此，利用分子标记技术对选择性状进行分子标记，是分子标记辅助育种和分子设计育种等工作的基础，同时主要农艺性状分子标记的获得，对于控制该性状基因的研究也具有十分重要的理论和实际意义。

SSR（Simple Sequence Repeat）标记是一种操作简便的分子标记，属于显性标记，在基因组中分布平均、多态性高、结果准确，在许多农作物的遗传多样性研究、分子标记、基因定位和分子标记辅助育种等方面广泛应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种辅助鉴定具有绿子叶性状大豆的方法。

本发明提供了一种辅助鉴定具有绿子叶性状大豆的方法（方法甲），包括如下步骤：以待测大豆的基因组DNA为模板，用Satt408引物对进行PCR扩增；如果所述PCR扩增在180-220bp区间内只得到了190bp±5bp的产物，待测大豆为候选的具有绿子叶性状的大豆；如果所述PCR扩增在180-220bp区间内没有得到190bp±5bp的产物，或所述PCR扩增在180-220bp区间内除了得到190bp±5bp的产物还得到了190bp±5bp以外的产物，待测大豆为候选的不具有绿子叶性状的大豆；所述Satt408引物对由序列表的序列1所示的单链DNA分子和序列表的序列2所示的单链DNA分子组成。

本发明还提供了所述Satt408引物对在辅助鉴定具有绿子叶性状的大豆中的应用。

本发明同时提供了所述Satt408引物对在制备辅助鉴定具有绿子叶性状的大豆的试剂盒中的应用。

所述Satt408引物对或所述方法（方法甲）可用于筛选具有绿子叶性状的大豆。

所述Satt408引物对或所述方法（方法甲）可用于绿子叶性状大豆的育种，即将所述方法鉴定为的绿子叶性状大豆用于育种。

在方法甲的基础上，本发明还提供了另一种准确度更高的辅助鉴定具有绿子叶性状的大豆的方法（方法乙），包括如下步骤：以待测大豆的基因组DNA为模板，分别用Satt408引物对和Satt129引物对进行PCR扩增；如果同时满足特定条件甲和特定条件乙，待测大豆为候选的具有绿子叶性状的大豆；如果不同时满足特定条件甲和特定条件乙，待测大豆为候选的不具有绿子叶性状的大豆；所述特定条件甲如下：采用Satt408引物对进行PCR扩增时，在180-220bp区间内只得到了190bp±5bp的产物；所述特定条件乙如下：采用Satt129引物对进行PCR扩增时，在120-160bp区间内只得到了130bp±5bp的产物；所述Satt408引物对由序列表的序列1所示的单链DNA分子和序列表的序列2所示的单链DNA分子组成；所述Satt129引物对由序列表的序列3所示的单链DNA分子和序列表的序列4所示的单链DNA分子组成。

本发明还保护所述Satt408引物对和所述Satt129引物对在辅助鉴定具有绿子叶性状的大豆中的应用。

本发明还保护所述Satt408引物对和所述Satt129引物对在制备辅助鉴定具有绿子叶性状的大豆的试剂盒中的应用。

引物组合物或所述方法（方法乙）可用于筛选具有绿子叶性状的大豆；所述引物组合物由所述Satt408引物对和所述Satt129引物对组成。

所述引物组合物或所述方法（方法乙）可用于绿子叶性状大豆的育种，即将所述方法鉴定为的绿子叶性状大豆用于育种。