[发明专利]转基因玉米BT11品系的环介导等温扩增引物、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种检测转基因玉米BT11品系的环介导等温扩增引物，其特征在于，碱基序列为SEQ ID NO：2~7。

2.一种转基因玉米BT11品系的环介导等温扩增法检测试剂盒，其特征在于，包括检测引物：SEQ ID NO：2~7。

3.根据权利要求2所述的转基因玉米BT11品系的环介导等温扩增法检测试剂盒，其特征在于，在检测试剂盒中：

每25μL的LAMP反应体系包括：SEQ ID NO：2~3各0.2μM、SEQ ID NO：4~5各1.6μM、SEQ ID NO：6~7各0.8μM、1×ThermoPol缓冲液、0.8mM甜菜碱、1.4mM dNTP、8UBst DNA大片段聚合酶；

其中上述1×ThermoPol缓冲液为：10mM KCl，20mM pH 8.8的Tris-HCl，10mM(NH₄)₂SO₄，2mM MgSO₄和0.1%Triton X-100。

4.利用权利要求2所述试剂盒检测转基因玉米BT11品系的方法，其特征在于，检测步骤包括：

①分别提取BT11转基因玉米品系标准样品和待测样品的基因组DNA；

②分别以步骤①精提的DNA作为模板，利用环介导等温扩增法检测：

每25μL的LAMP反应体系，其包括：DNA模板200ng、SEQ ID NO：2~3各0.2μM、SEQ ID NO：4~5各1.6μM、SEQ ID NO：6~7各0.8μM、1×ThermoPol缓冲液、0.8mM甜菜碱、1.4mM dNTP、8U Bst DNA大片段聚合酶、蒸馏水：余量；

其中上述1×ThermoPol缓冲液为：10mM KCl，20mM pH 8.8的Tris-HCl，10mM(NH₄)₂SO₄，2mM MgSO₄和0.1%Triton X-100；

反应条件为：63℃恒温反应60min，80℃下保温5min；

③环介导等温扩增法的检测结果以肉眼、浊度法或显色法进行判断。

5.根据权利要求4所述的检测转基因玉米BT11品系的方法，其特征在于，所述步骤③中的浊度法利用LAMP实时浊度仪完成。

6.根据权利要求4所述的检测转基因玉米BT11品系的方法，其特征在于，所述步骤③中的显色法使用荧光染料SYBR Green I。