[发明专利]甘露聚糖酶Man23及其基因改造无效
| 申请号： | 201210337167.8 | 申请日： | 2012-09-05 |
| 公开（公告）号： | CN102943068A | 公开（公告）日： | 2013-02-27 |
| 发明（设计）人： | 周海燕;吴永尧 | 申请（专利权）人： | 周海燕;吴永尧 |
| 主分类号： | C12N9/42 | 分类号： | C12N9/42;C12N15/56;C12N15/63;C12N1/21;C12N15/74;C12R1/125;C12R1/01 |
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| 地址： | 410128 湖南省长沙*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 甘露 聚糖 man23 及其 基因 改造 | ||
【权利要求书】：
1.一种来源于枯草芽孢杆菌(Bacillus Subtilis)B23的β-甘露聚糖酶Man23，其完整的DNA序列为SEQID NO：1，突变体DNA序列为SEQ ID NO：2。
2.如权利要求1所述的β-甘露聚糖酶Man23，其氨基酸序列为SEQ ID NO：3，其突变体核苷酸序列为SEQID NO：4。
3.一种重组表达质粒，其中含有权利要求1所述的DNA分子。
4.一种表达宿主，该宿主细胞含有权利要求3所述的重组表达质粒。
5.权利要求4所述的表达宿主细胞为短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)。
6.一种制备重组甘露聚糖酶的方法，该方法包括：
(a)提取枯草芽孢杆菌B23的基因组DNA；
(b)以提取的基因组DNA为模板，进行PCR扩增；
(c)将PCR扩增产物克隆入载体pBS-T后转化大肠杆菌；
(d)对大肠杆菌中的重组质粒进行点突变，获得突变库；
(e)筛选获得的高活性突变体基因克隆入表达载体pHY-p43；
(f)将得到的重组表达载体转化表达宿主短短芽孢杆菌；
(g)分离、鉴定并纯化表达产物。
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