[发明专利]一种小单孢菌菌株、制备方法及其应用

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种小单孢菌菌株，该小单孢菌菌株的制备方法，及该小单孢菌菌株的应用。

【背景技术】

小单孢菌属(Micromonospora)属于放线菌目小单孢菌科(Micromonosporaceae)，因菌丝上着生单个孢子而得名，该属菌为革兰氏阳性菌,不抗酸,好氧或微好气,化能异养菌,基内菌丝发达,分枝有隔。在基内菌丝上长单个孢子,有梗或无梗,孢子不游动。小单孢菌是抗生素的重要来源。临床上应用的许多氨基糖抗生素如庆大霉素等都是小单孢菌产生的。目前从该属发现的抗生素种类仅次于链霉菌，达450种以上。1987年从Caliche土壤样品中分离的棘孢小单孢菌Micromonospora echinospora subsp.calichensis产生结构新颖的烯二炔类抗肿瘤抗生素Calicheamicinγ₁。该化合物细胞毒性高，至少是多柔比星的1000倍。该药物的第一个抗体靶向化疗药物CMA-676(Mylotarg)^TM以在临床应用，它可治疗严重、快速发展的致命性疾病急性骨髓性白血病(acute myeloid leukaemia)。从斐济海鞘(Polysyncraton lithostrotum)中分离到小单孢菌Micromonospora lomaiviticins,它产生抗肿瘤和细胞毒的抗生素Lomaiviticins即Lomaiviticins A和B(重氮苯并芴葡萄糖苷对称二聚体)。Lomaiviticins是很强的破坏DNA的药物，BIA<0.1ng/spot。Lomaiviticins A对许多肿瘤细胞株作用强，IC50为0.01-98ng/ml,细胞毒作用方式与已知DNA损害剂多柔比星、丝裂霉素不同。它还具有很强的抗金黄色葡萄球菌和粪肠球菌的作用，MIC为6-25ng/spot,已进入I期临床实验。综上所述，在小单孢菌中已发现了一些具有重要商业价值的次级代谢产物，它们是新生素和其他生物活性物质的重要微生物来源。

【发明内容】

本发明所要解决的技术问题之一在于提供一种小单孢菌菌株。

本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题之一的：一种小单孢菌菌株，所述菌株为小单孢菌菌株FIM07-0019(Mciromonospora sp.FIM07-0019)，于2012年8月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.6474。

本发明所要解决的技术问题之二在于提供一种所述的小单孢菌菌株的分离方法，充分利用中国的海洋药物资源，简单易行。

本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题之二的：一种所述的小单孢菌菌株的分离方法，包括以下步骤：

步骤100：将2克采集于智利南部43°32′0′S，72°52′0′W，水深20米的海底海泥用无菌陈海水稀释成10^-1和10^-2倍；

步骤200：分别取原液及稀释过的样品悬液0.1mL涂布于燕麦琼脂培养基进行菌种分离，并于30℃下培养2周，得到小单孢菌菌FIM07-0019。

进一步地，所述燕麦琼脂培养基组分为：燕麦粉2%、琼脂2%、重铬酸钾50mg/L、微量元素溶液0.1ml/100ml，其余成分为水，且所述水包括质量比为1∶1的蒸馏水和海水；所述微量元素溶液包括如下组分：FeSO₄·7H₂O0.1g，MnCl₂·4H₂O 0.1g，ZnSO₄·7H₂O 0.1g，蒸镏水1000ml。

本发明所要解决的技术问题之三在于提供一种所述的小单孢菌菌株制备大环内脂类化合物的方法，通过提取分离该新菌株的发酵液获得了一种能够抑制肿瘤的大环内脂类化合物。

本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题之三的：一种所述的小单孢菌菌株制备大环内脂类化合物的方法，包括以下步骤：

(1)制备小单孢菌菌株FIM07-0019发酵液：将一铂环小单孢菌菌株FIM07-0019的燕麦琼脂斜面培养物接入种子培养基，于温度35℃，转速220rpm/min下培养48h；然后按10%的移种量转入发酵培养基，并于温度28℃，转速220rpm/min下振荡培养96～120h；