[发明专利]携带FL基因重组质粒的纳米阳离子脂质体、制备方法及应用无效
| 申请号： | 201210352706.5 | 申请日： | 2012-09-21 |
| 公开（公告）号： | CN102876697A | 公开（公告）日： | 2013-01-16 |
| 发明（设计）人： | 孙念峰;田爱玲;胡三元;陈景波;黄庆先 | 申请（专利权）人： | 孙念峰 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;A61K48/00;A61K9/127;A61P35/00 |
| 代理公司： | 济南诚智商标专利事务所有限公司 37105 | 代理人： | 韩百翠 |
| 地址： | 250013 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 携带 fl 基因 重组 质粒 纳米 阳离子 脂质体 制备 方法 应用 | ||
1.携带FL基因重组体的纳米阳离子脂质体，其特征是，由Lipofectamine 2000和携带FL基因的重组质粒pEGFP-cl-FL构成；所述携带FL基因的重组质粒pEGFP-cl-FL为将FL基因克隆至pEGFP-c1载体中制得。
2.如权利要求1所述的携带FL基因重组体的纳米阳离子脂质体，其特征是，Lipofectamine2000和携带FL基因的重组质粒pEGFP-cl-FL的比例为8:1，其中Lipofectamine 2000以体积μl计，携带FL基因的重组质粒pEGFP-cl-FL以质量μg计。
3.一种制备权利要求1或2所述的携带FL基因重组体的纳米阳离子脂质体的方法，其特征是，
（1）基因的合成：化学合成如SEQ-1所述的FL基因序列，将合成的基因进行序列测定；
（2）重组质粒puc57-FL的制备：将FL基因克隆至puc57载体的Sal Ⅰ和BamH Ⅰ之间，并将克隆有FL基因的重组质粒puc57-FL进行酶切验证及序列测定；
（3）重组质粒puc57-FL亚克隆至pEGFP-c1载体构建重组质粒pEGFP-cl-FL：以Sal Ⅰ和BamH Ⅰ同时对重组质粒puc57-FL及pEGFP-c1载体进行双酶切，琼脂糖凝胶电泳分别回收酶切产物；将puc57-FL的酶切产物连接到pEGFP-c1载体酶切产物中，然后转化大肠杆菌感受态细胞，提取质粒，经Sal Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切鉴定正确后，并对阳性菌种提取的重组质粒pEGFP-cl-FL进行测序；
（4）携带重组质粒阳离子纳米脂质体的制备：取Lipofectamine 2000加入无血清RPMI1640培养基；取步骤（3）构建的重组质粒pEGFP-cl-FL用无血清RPMI1640培养基稀释后，将两者混匀后，然后室温下孵育20±5min，即得携带FL基因重组质粒的纳米阳离子脂质体。
4.权利要求1或2所述的携带FL基因重组体的纳米阳离子脂质体在抑制肿瘤生长方面的应用。
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