[发明专利]一种戈舍瑞林的纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种多肽的纯化方法，尤其涉及戈舍瑞林的纯化方法。

背景技术

戈舍瑞林分子式为：Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH₂, 化学结构式为：

戈舍瑞林对男性前列腺癌和女性乳腺癌有较好的治疗作用。目前常用的肿瘤药物主要是化学药物，由于化疗反应大，所以寻找一种合适的生物药物是大势所趋，目前比较好的是促性腺释放激素类似物(LHRH-a) ，长期大量应用LHRH-a不仅不会引起促性腺激素分泌过多，反而抑制垂体释放促性腺激素，LHRH－a开始使Leydig细胞产生睾酮上升约3月～5月，以后下降21日～28日即可达到去睾水平。该药优点是副作用少，无心血管并发症，停药后睾丸功能有可复性。有时可用之检查前列原癌对雄激素是否依赖，如依赖可继续用药或睾丸切除。LHRH-a常用药为戈舍瑞林，一个月即可达到药物去睾，近年在用常效缓释LHRH-a，一次用药有效期达1个月。在广泛用于治疗前列腺癌的LHRH-a类药物中,以戈舍瑞林为例,大量的数据表明,与睾丸切除术相比,患者在总生存率、症状缓解率、客观反应率和治疗失败时间等方面基本等效;但二者相比,药物去势治疗具有以下优点:有明显的患者选择优势、可逆、心理和生理的微创性、可长期或间歇使用、明显提高生活质量。

目前涉及到戈舍瑞林合成的文献和专利较多，但涉及到纯化的几乎没有，特别是本发明的大规模纯化制备（一批可得精品100克以上）和高纯度（纯度达99.5%以上，最大单杂0.1%），更是没有涉及。现有技术例如专利CN101759777A涉及到有关戈舍瑞林纯化的内容，但其工艺只能达到98.5%，更不用说单杂0.1%以下了；作为一种治疗前列腺癌的新型药品（其在欧洲药典EP有规定单杂要小于0.5%，考虑到其稳定性和有效期等因素，所以其纯化工艺必须达到能够得到单杂小于0.1%的标准，否则很难成药。因此本发明相对现有技术具有显著的进步。

发明内容

本发明提出了一种纯化戈舍瑞林的方法，纯度高且收率好，达到产业化要求。

为实现上述目的，综合考虑戈舍瑞林本身的性质，本发明提供的技术方案包括以下步骤：

步骤1）：以体积比5%—20%的醋酸和体积比15%—40%的甲醇的水溶液按照50g/L—100g/L的浓度溶解粗肽，得粗肽溶液；步骤1）下文表述为“前处理”。 其中，溶液的浓度均为体积比浓度，溶剂为水。

选择体积比5%—20%的醋酸和15%—40%的甲醇水溶液混合溶剂系统是经过大量试验摸索得到溶剂系统和比例区间，在此范围内溶解效果最好，溶解液的体积小，所以上样纯化的体积小，从而确保了纯化的分离效果。否则的话需要对样品溶液进行浓，其他溶剂均达不到此溶解效果。

若溶液中的醋酸和甲醇的体积比例大于20%，用水稀释到20%以下，备用。因为当醋酸和甲醇的体积比例大于20%，易导致粗肽挂不上色谱柱，达不到分离效果。

步骤2）：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，将粗肽溶液进样，以体积比浓度为0.1%—0.8%和pH值为4.0—7.5盐的水溶液为A 相，乙腈为B相，体积比浓度B%为10%—50%(即 A相和B相的比例为10：90-50：50)，进行梯度洗脱；步骤2）下文表述为“纯化”。

体积比浓度为0.1%—0.8%和pH值为4.0—7.5盐的水溶液是指体积比浓度为0.1%—0.8%酸的水溶液用碱的水溶液调节pH值为4.0—7.5得到的水溶液；其中，酸指磷酸、硫酸、醋酸或高氯酸中的一种或两种以上的混合；碱是指氢氧化钠、氨水或三乙胺。

所述“粗肽”是指采用液相合成法或固相合成法得到的，尚未经过精制处理的戈舍瑞林粗肽或者纯度不能满足药用的戈舍瑞林。“粗肽溶液”是指步骤1）所得粗肽溶液，所使用的水为纯净水，并符合注射用水标准，优选超纯水；所使用的醋酸为分析纯的冰醋酸，本发明的“乙腈”的纯度级别优选色谱纯。

A相和B相的体积比例为10：90—50：50，优选20：80—40：60(可表示为体积比浓度B%为20%—40%)，使用该洗脱体系，可以有效的保证分离效果和纯化收率，其中，特别是当洗脱体系中B%不在10%—50%范围内，易导致样品不挂柱或提前冲出，达不到分离效果。

现有技术CN101759777A的洗脱系统收率低，纯度仅能达98.5%，而本发明纯化收率可达70%以上，纯度99.5%以上且任一杂质不大于0.1%，可以用来标定工作标准品和进行药品注册申报。