[发明专利]一种血红蛋白类携氧载体及其制备方法

权利要求书

1.一种血红蛋白类携氧载体，其特征在于：包含血红蛋白、结合珠蛋白和聚乙二醇－聚酯纳米粒，血红蛋白通过结合珠蛋白连接在聚乙二醇－聚酯纳米粒表面。

2.根据权利要求1所述的血红蛋白类携氧载体，其特征在于：其粒径为80~400nm。

3.根据权利要求2所述的血红蛋白类携氧载体，其特征在于：其粒径为200~300nm。

4.根据权利要求1所述的血红蛋白类携氧载体，其特征在于：血红蛋白的含量为6~12%（w/w），血红蛋白与结合珠蛋白的摩尔比为1：1。

5.根据权利要求1所述的血红蛋白类携氧载体，其特征在于：所述聚乙二醇－聚酯纳米粒为聚乙二醇-聚己内酯纳米粒或者聚乙二醇-聚乳酸纳米粒。

6.根据权利要求1所述的血红蛋白类携氧载体，其特征在于：所述聚乙二醇－聚酯纳米粒与结合珠蛋白通过硫醚键或酰胺键连接。

7.根据权利要求1所述的血红蛋白类携氧载体，其特征在于：所述血红蛋白类携氧载体氧亲和力P₅₀值为10~36mmHg，Hill系数为1.30~2.90，pH值为7.2~7.5。

8.根据权利要求1所述的血红蛋白类携氧载体，其特征在于：它还包括抗氧化剂，抗氧化剂包裹于聚乙二醇－聚酯纳米粒中。

9.根据权利要求8所述的血红蛋白类携氧载体，其特征在于：所述抗氧化剂为抗坏血酸、超氧化物岐化酶、过氧化氢酶、过氧化物酶、维生素E、谷胱甘肽、连二亚硫酸钠、N-乙酰半胱氨酸中的一种或一种以上的组合。

10.权利要求1所述血红蛋白类携氧载体的制备方法，其特征在于：它包括如下步骤：

a、取结合珠蛋白、巯基化结合珠蛋白或者羧基活化的结合珠蛋白，以及带有官能团的聚乙二醇－聚酯纳米粒溶于磷酸盐缓冲液中，结合珠蛋白与纳米粒的重量比为1:5~10，4℃震荡18~30小时，磷酸盐缓冲液洗涤，10000~14000g离心，得沉淀；

b、将步骤a所得沉淀溶于磷酸盐缓冲液中，加入血红蛋白，血红蛋白与结合珠蛋白的重量比为（2~4）：（1~3），4℃避光反应2~6小时，分离纯化，浓缩冻干，即得血红蛋白类携氧载体。

11.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于：步骤a所述官能团为单马来酰亚胺、羧基或者氨基。

12.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于：步骤a所述聚酯是聚乳酸或聚己内酯。

13.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于：步骤a所述纳米粒中包裹抗氧化剂。

14.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于：所述步骤a中，结合珠蛋白和纳米粒重量比为1:5或者1:10；震荡24小时；12000g离心。

15.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于：所述步骤b中，血红蛋白与结合珠蛋白的重量比为3：2；避光反应2小时；分离纯化方法为：离心或凝胶色谱柱分离纯化，至上清液或洗脱液在400-600nm无明显吸收峰为止，收集沉淀或者洗脱液。