[发明专利]一种长片段末端文库的构建方法

权利要求书

1.一种长片段末端文库的构建方法，其特征在于，所述的方法的步骤如下：

1）首先将基因组DNA随机打断，并将打断的DNA进行末端缺口补齐修复；

2）将修复的DNA片段的3′端加上脱氧腺苷酸A，制成A-Fragment；

3）将制成A-Fragment与3′端带有突出的脱氧胸甘酸T的 LMP Adaptor进行粘性末端的连接，获得环状的LMP-Adaptor-Fragment；

4）将去除了未环化的线性分子的LMP-Adaptor-Fragment用不少于两种的识别四个碱基的限制性内切酶消化adaptor以外的区域，获得相应的酶消化文库；   

5）将步骤4）获得的酶消化文库中的片段进行末端缺口补齐修复后，按照步骤3）再次进行环化；

6）将步骤5）获得的环化产物用核酸外切酶消化去除未环化的线性分子；用纯化后的环状分子作为模版，LMP Adaptor的引物进行扩增，扩增产物回收后完成长片段末端文库的构建。

2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于所述的步骤1）将打断的DNA进行末端缺口补齐修复是用T4 DNA polymerase来进行的。

3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于所述的步骤4）中所述的识别四个碱基的限制性内切酶为Hha I、Nla III、Hpa II、Mse I或MluC I。

4.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于所述的步骤6）中的LMP Adaptor的引物的序列为SEQ ID NO:1和2。