[发明专利]三七快速鉴定方法

说明书

技术领域

本发明术语中药材来源品种鉴定技术领域，具体涉及用特异的SNP鉴定三七的方法。

背景技术

三七（Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen）是人参属多年生植物，是我国传统中药材，含有多种生物活性成分。三七是名贵中药材，具有散瘀止血，消肿定痛之功效。可治疗各种出血症，人参“补气第一”,三七“补血第一”,味同而功亦。三七与人参(Panax ginseng C.A.Mey)、西洋参（Panax quinquefolium L.）、竹节参（Panax japonicus C.A.Mey.）及其变种狭叶竹节参（Panax japonicus C.A.Mey.var.angustifius(Burk)Cheng et Chu）、珠子参（Panax japonicus C.A.Mey.var.major(Burk)C.Y.Wu et K.M.Feng）、姜状三七（Panax zingiberensis C.Y.Wu et K.）、屏边三七（Panax stipuleanatus Tsai et Feng）和假人参（Panax pseudoginseng Wall.）均作为药物使用，它们来源于同科、同属，为亲缘关系相近的植物，这几种药物在药性和功效方面有很大区别，尤其是三七归为活血、止血类药物而非滋补性药物，在中医临床上也区别使用。三七药材价格昂贵，市场上常出现其混伪品。由于三七与其近缘种、混伪品外形类似，传统的性状鉴别对三七与其近缘种的鉴定有一定困难，尤其对于药材市场存在的三七切片、粉末、种子和种苗的鉴别具有更大障碍。这就需要寻找到一种稳定可靠的方法将三七药材、饮片、粉末加以鉴定区分。

发明内容

本发明第一个目的在于提供三七鉴定用SNP标记。

本发明第二个目的在于提供三七鉴定用SNP标记在三七鉴定中的应用。

本发明第三个目的在于提供三七快速鉴定方法

本发明提供的三七鉴定用SNP标记，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，其中，SEQ ID No.1所示序列的5’端起第140位三七为T，其他物种为A或缺失；第207位三七为T，其他物种为C或A。

本发明提供的SNP可用于鉴定三七，如果自SEQ ID No.1所示序列的5’端起第140位为T或第207位为T，则鉴定为三七，如果自SEQ ID No.1所示序列的5’端起第140位和第207位不为T，则待鉴定样品不是三七。

本发明提供的三七鉴定方法，其包括如下步骤：

1）以待测样品DNA为模板，扩增含有SEQ ID No.1所示序列的片段；

2）对扩增产物进行测序，拼接后去除序列两端5.8S和26S基因区，获得完整ITS2基因间隔区，通过分析SEQ ID No.1所示的序列，确定自SEQ ID No.1所示序列的5’端起第140位或第207位的碱基。

其中，如果自SEQ ID No.1所示序列的5’端起第140位为T或第207位为T，则鉴定为三七，否则不是三七。

本发明扩增时使用的引物序列为：

ITS2F 5′-ATGCGATACTTGGTGTGAAT-3′

ITS3R 5′-GACGCTTCTCCAGACTACAAT-3′

上述引物用于扩增三七的ITS2序列。

本发明还提供含有上述引物的试剂盒。

本发明提供了上述试剂盒在三七鉴定中的应用。

本发明方法适用性更广，能检测所有能提取出DNA的三七任何样品。因此，能够实现三七原植物与近缘种、药材、生饮片、粉末与混淆品的快速、准确鉴定。

附图说明

图1所示为ITS2序列的扩增结果，其中1-11分别代表SN01-SN11的扩增结果，CK为阴性对照。

图2所示为三七（P.notoginseng）的三个种内变异类型。

图3所示为三七（P.notoginseng）和其他物种ITS2序列的比对结果，其中图3a为ITS2基因间隔区，5’端起第140位，三七为T，其他物种为A或缺失；图3b为在第207位，三七为T，其他物种为C或A。

图4所示为三七与混伪品构建NJ树结果。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1三七药材原料的鉴定方法