[发明专利]芘标记的单链DNA荧光探针及其制备方法

权利要求书

1.一种芘标记的单链DNA荧光探针，其特征是：该探针具有水溶性，可与互补的目标DNA形成双螺旋结果，不可与不互补的DNA形成双螺旋结构。

2.如权利要求1所述的单链DNA荧光探针，其特征是：该探针由单链DNA与一种带有荧光基团的阳离子聚电解质通过静电作用和疏水作用互相吸附而得到，技术手段简单。

3.如权利要求2中所述的一种阳离子聚电解质，其特征是所述阳离子聚电解质接枝有荧光基团芘，具有水溶性，且是阳离子性的聚合物。

4.一种如权利要求3中所述的一种阳离子聚电解质的制备方法，其步骤包括：

（1）荧光基团芘甲溴分子的制备：

冰点温度下将芘甲醇溶于三氯甲烷中，将摩尔量是芘甲醇的1/2倍的三溴化磷加入该溶液，冰浴搅拌12个小时，然后加入饱和碳酸氢钠水溶液至中性，分层，取有机层进行蒸馏，重结晶，并干燥得到芘甲溴；

（2）将芘甲溴接枝到聚4-乙烯基吡啶上：

将聚4-乙烯基吡啶溶于三氯甲烷中，再加入1/10于聚4-乙烯基吡啶单体摩尔量的芘甲溴，68℃下搅拌、回流24小时，然后将反应液缓慢滴加入四氢呋喃中得到沉淀，过滤，洗涤，干燥后得到中间产物；

（3）用溴代正丁烷进一步接枝到中间产物：

将中间产物溶于乙醇，并加入5倍于聚4-乙烯基吡啶单体摩尔量的溴代正丁烷，85℃下搅拌、回流24个小时，然后将反应液缓慢滴加入四氢呋喃中得到沉淀，过滤，洗涤，干燥得到产物阳离子聚电解质。

5.如权利要求4所述的方法，其特征是：所述的步骤（2）是将芘按1:10的比例接枝于吡啶上，比例不能太大。

6.如权利要求4所述的方法，其特征是：所述的步骤（3）是用溴代正丁烷将中间产物季铵化，为了得到具有水溶性的聚阳离子产物。

7.一种如权利要求1或2所述的芘标记的单链DNA荧光探针的制备方法，其制备步骤是：将芘接枝聚4-乙烯基吡啶阳离子和一种DNA单链共同溶于缓冲液中，形成复合探针。

8.如权利要求7所述的方法，其特征是：阳离子浓度可以在2×10^-8M到2×10^-6M之间,单链DNA浓度在1.0×10^-7M到1.0×10^-5M之间，缓冲液为磷酸盐缓冲液，pH = 7.4。