[发明专利]一种蛇龙珠葡萄品种葡萄病毒病的脱除与苗木快繁方法

权利要求书

1.一种蛇龙珠葡萄品种葡萄病毒病的脱除与苗木快繁方法，其特征在于包括营养系初选、试管苗茎尖培养、热处理脱毒、试管苗移栽驯化、病毒检测、无病毒苗木快繁步骤，其中：

1）营养系初选步骤：

春季在蛇龙珠酿酒葡萄品种园选择无明显扇叶病毒症状的植株，作好标记，在此基础上于当年秋季选择结果性状良好、无明显或无卷叶病毒症状的植株，并作好标记；

2）试管苗茎尖培养步骤：

先于转年春季五月份，在葡萄品种园中剪取做好标记的各植株健康嫩梢上部，去掉叶片，剪成单芽茎段，用自来水冲洗2－3小时，备用；

在超净工作台上，将上述备用单芽茎段用70％的酒精浸洗振荡10秒钟后，用0.1%升汞加一滴吐温，摇动5－10分钟后，用无菌水冲洗4-5次，剪除两端接触药液部分，剪成1－2厘米单芽芽段，插于培养基上，进行培养，得到试管组培苗；

3）热处理脱毒步骤：

在超净工作台无菌条件下，将上述试管组培苗茎尖剪下0.1--0.5cm，接种到培养基上，进行培养，成苗后继代培养，扩大繁殖待其生根；生根后，将其直接置于培养箱中，温度最初为25℃，以后用一个星期时间逐渐升温至37±1℃，并在该条件下培养1个月；

4）试管苗移栽驯化步骤：

取上述热处理后的试管苗的茎尖，0.3--0.5cm左右，进行组织培养，培养温度为25±2℃，待培养瓶中的试管苗长至6－7cm时，在培养室或温室中将瓶口打开，敞口锻炼2-3天后，去掉培养基，用20－25℃的水冲洗掉琼脂，栽入盛有蛭石的周转箱中，并用玻璃板或塑料薄膜盖好，保持其内小气候，湿度100％，温度25℃，每天喷水一次，并通风1.5--2小时，3天后可开一小缝隙放风，以后逐渐将缝隙加大，直至全部揭开，每周喷一次营养液，驯化10天后，将其移入培养钵中培养成苗；

5）病毒检测

将营养钵中生长的葡萄苗的叶子取下，进行病毒检测，检测苗木是否带有葡萄病毒病；

6）无病毒苗木快繁

将上述检测无病毒的葡萄苗采用培养基进行上述步骤中组培、扩大繁殖及移载驯化，形成无病毒苗木的快速繁殖。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于上述步骤中所使用的培养基为：B₅+0.2ppmIAA+0.01ppm 6-BA培养基，培养基的厚度为2.3--2.5cm。

3.根据权利要求2所述培养基，其特征在于其制备方法为：将B₅+0.2ppmIAA+0.01ppm 6-BA，附加蔗糖浓度2％，琼脂浓度0.4-0.6%，将PH值调至为5.8，在1.2--1.3KG/CM²的高压锅压力下，灭菌时间15－20分钟制得。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述试管苗茎尖培养步骤中单芽芽段在培养基上的培养条件为：培养室温度25±2℃，光照时间每天12小时，照度为双管40W日光灯。