[发明专利]巴卢西班的制备方法

权利要求书

1.一种制备巴卢西班的方法，包括：

1)使Fmoc-N-Me-Orn(Boc)-ol在有机碱的存在下于溶剂中与羧基树脂反应，得到Fmoc-N-Me-Orn(Boc)-树脂；

2)使Fmoc-N-Me-Orn(Boc)-树脂在有机碱的存在下脱除Fmoc，然后在偶联剂体系的存在下于溶剂中与Fmoc-HomoCys(mmt)-OH偶联，重复脱Fmoc步骤和偶联步骤，依次偶联Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-AlloIle-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-D-Trp(Boc)-OH和3-卤代丙酸，得到线性肽树脂

XCH₂CH₂CO-NH-D-Trp(Boc)-Ile-AlloIle-Asn(Trt)-HomoCys(mmt)-N-Me-Orn(Boc)-树脂，

其中X=卤素；

3)用侧链脱保护液使所述线性肽树脂脱除mmt侧链；

4)用有机碱溶液使所述线性肽树脂环化，得到巴卢西班肽树脂；

5)巴卢西班肽树脂在裂解液的存在下反应得到巴卢西班。

2.权利要求1的方法，其中步骤4)中所述的有机碱例如，但不限于，DIPEA、TEA、TMP、四甲基胍、N-甲基吗啉，优选TEA、DIPEA和四甲基胍，其体积浓度为0.05-10%，优选0.1-8%，更优选0.5-5%；有机碱溶液体积用量为0.5-50mL/g树脂，优选1-30mL/g树脂，更优选2-20mL/g树脂；其中步骤4)的反应温度为室温。

3.权利要求1或2的方法，所述线性肽树脂中的X，为氟、氯、溴、碘，优选氯、溴、碘。

4.权利要求1或2的方法，步骤5)中获得的巴卢西班可采用所有常用于纯化肽的方法进行纯化，例如，但不限于，不良溶剂沉淀法、HPLC、凝胶色谱或离子色谱等，优选先用不良溶剂沉淀，再借助HPLC进一步纯化。

5.权利要求1或2的方法，其中在步骤1)中，所述羧基树脂包括，但不限于苯甲酸树脂、羧基氯醋树脂、羧基丁腈树脂等，优选苯甲酸树脂；与氨基酸反应前，所述羧基树脂的替代度为0.05-3.0mmol/g，优选0.1-2.5mmolg，更优选0.2-2.0mmol/g。

6.权利要求1或2的方法，其中在步骤1)中，与氨基酸反应后，树脂的替代度为0.05-1.5mmol/g，优选0.1-1.2mmol/g，更优选0.2-1.0mmol/g。

7.权利要求1或2的方法，其中在步骤1)中，Fmoc-N-Me-Orn(Boc)-ol与羧基树脂反应之后，优选地在适量有机碱的存在下用适量的醇（例如，但不限于甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇等，优选甲醇）处理树脂。

8.权利要求1或2的方法，其中在步骤2)中，使Fmoc脱除的试剂为步骤1)中所述的有机碱的溶液，优选体积浓度为5-90%，优选10-70%，更优选15-50%的哌啶的DMF溶液，其用量不受限制，适量即可。

9.权利要求1或2的方法，其中在步骤3)中，使巴卢西班线性肽树脂中的HomoCys(mmt)脱除侧链mmt的试剂是体积比为1-3:0-5:0-3:89-99的TFA:TES:EDT:DCM侧链脱保护液。

10.权利要求1或2的方法，其中在步骤5)中，所述裂解液为体积比为85-95:2-5:0-3:0-2:1-5的TFA:TIS:EDT:PhOH:H₂O混合物；裂解液的用量为2-30mL/g树脂，优选3-20mL/g树脂，更优选5-15mL/g树脂，反应时间为0.5-10小时，优选1-8小时，更优选1.5-5小时。