[发明专利]一种人体液HSP70胶体金标检测试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于免疫学分析技术领域，具体涉及一种人体液中HSP70胶体金标检测试纸条及制备方法。

背景技术

热休克蛋白家族(HSPs)是一类高度保守的蛋白，热休克蛋白70（heat shock protein 70, HSP70）是热休克蛋白家族中的重要成员，其分为诱导型的组成型的。当机体受到外界环境中多种不良因素刺激时，诱导型的HSP70蛋白表达升高。HSP70蛋白对细胞损伤的修复、存活和维持正常的细胞功能是必需的。在环境刺激、病原菌感染、疾病引起细胞应激损伤中发挥分子伴侣作用，阻止蛋白聚集，促进损伤蛋白的重新折叠。在大多数的哺乳动物，只有在应激条件下诱导型HSP70表达，而且显著的细胞和机体应激后才能检测到，但是在人和灵长类，诱导型的HSP70有一个基准值，在一些特殊条件下如过热、化学有毒物质暴露、缺氧、缺体、感染、自身免疫性疾病、凋亡、器官移植、细菌和病毒引起的感染，动脉粥样硬化等心体管疾病中，生物体的HSP70表达显著升高；在正常老化过程，精子发生，月经，运动练习等正常生理过程中，生物体的HSP70表达也显著升高，提示其在这些过程中可能发挥重要作用。

酶联免疫吸附分析（enzyme linked immμnosorbent assay，ELISA）技术是目前进行体液生物蛋白检测最为常用的方法，与其他检测方法相比，ELISA检测方法具有成本低、检测设施设备简单、快速高效的特点，并在不断改进当中，已经有直接ELISA、间接ELISA、单抗体ELISA，微波ELISA、双抗体夹心ELISA方法。但是ELISA方法，目前只适用于实验室检测，不能适用于现场检测。

应激是机体在对生存环境中多种不利因素适应过程中, 实际或认知上的要求与适应和应付能力之间不平衡导致的身心紧张状态及其反应。应激同人的健康有密切联系，这种联系是双向的：一方面应激可影响人的健康，另一方面一个人的健康状况也会影响应激条件下心理应激反应的强度和对应激的耐受力。适度的心理应激是人成长和发展的必要条件，适当的应激有助于维持人的生理、心理和社会功能，应对挑战既可以引起我们的紧张、劳累、苦恼和痛苦，又可以为我们带来成功的喜悦、轻松和欢乐。但是长期、超过人适应和应对能力的应激就会损害人的健康，这是心理应激对健康的消极影响，主要表现在下述三个方面。

首先，心理应激引起的心理和生理反应可以以症状和体征的形式见之于临床，成为人们身体不适、虚弱和精神痛苦的根源和就医需求帮助的原因；其次，心理应激可以加重已有的精神障碍和躯体疾病，或使这些疾病复发；最后，心理应激可以造成对疾病的易感状态，并且在其他因素的共同作用下导致新的精神障碍和躯体疾病。

随着研究的深入， HSP70作为应激的生物标记物，可以检测机体应激水平，预防应激损伤的发生，用于机体应激负荷健康风险评估。

发明内容

本发明的目的是克服现有检测HSP70技术的不足，提供一种人体液HSP70胶体金检测试纸条。

本发明的目的还在于提供上述检测试纸条的制备方法。

一种人体液HSP70胶体金标检测试纸条，此试纸条由设在固定板1上依次相连的样品垫2、金标垫3、硝酸纤维素膜4和吸水纸9组成；在硝酸纤维素膜4上设有第一检测线5、第二检测线6和第三检测线7和一条质控线8；在金标垫3上设有金标抗体。

固定板1为具有压敏胶的PVC板，样品垫2为玻璃纤维膜，金标垫3为聚酯纤维膜。

金标抗体为显色抗体，检测线为捕捉抗体，显色抗体与捕捉抗体为1对双抗体夹心配对的鼠抗人HSP70单克隆抗体。

金标抗体用粒径为20nm-60nm的胶体金颗粒标记。

质控线8为羊抗鼠免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）。

上述人体液HSP70胶体金标检测试纸条的制备方法，包括以下步骤：

（1）用常规的柠檬酸三钠还原法制备均匀粒径为20nm-60nm的胶体金；

（2）调节上述胶体金pH为8.5-10，然后加入显色抗体与其反应，其中显色抗体的浓度为0.04mg/ml，离心得沉淀，重悬沉淀，得金标抗体溶液，将金标抗体溶液用喷墨仪喷印在聚酯纤维膜，晾干；

（3）将捕捉抗体用抗体稀释液稀释成浓度为1mg/ml的捕捉抗体溶液，用喷墨仪将捕捉抗体溶液在硝酸纤维素膜上喷划三条平行检测线，真空干燥； 

（4）将羊抗鼠IgG用抗体稀释液稀释成浓度为0.5mg/ml的羊抗鼠IgG溶液，用喷膜仪将抗体喷线在硝酸纤维素膜上形成质控线，真空干燥；