[发明专利]一种同时测定牛奶中磺胺甲基异恶唑和达氟沙星的荧光方法

权利要求书

1.一种同时测定牛奶中磺胺甲基异恶唑和达氟沙星的荧光方法，其特征在于，通过以下步骤实现：

（1）校正集样品制备：向阴性牛奶中添加一系列随机组合浓度梯度的磺胺甲基异恶唑和达氟沙星溶液。

（2）校正集样品的荧光测定：经过除蛋白质，加入荧光胺试剂衍生化后，采集三维荧光光谱。

（3）校正集模型的建立：对光谱数据预处理后，采用化学计量学方法的多元校正模型构建磺胺甲基异恶唑和达氟沙星两种物质的浓度和三维荧光光谱数据间的回归模型。

（4）模型的验证：采用交叉验证的方法建立校正模型；

（5）模型的预测能力：对未知样品采用与步骤（2）相同的预处理方法，采集其三维荧光光谱，收集到的光谱信息用步骤（4）获得的校正模型对其进行预测。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，牛奶样品的预处理为除蛋白质与荧光胺试剂衍生化，不包含其他化学分离。

3.根据权利要求1所述的方法，所述的除蛋白质采用加入30%（v/v）的三氯乙酸（TCA）溶液沉淀蛋白质的方法。

4.根据权利要求1所述的方法，所述的荧光胺试剂衍生化采用1mg/mL荧光胺丙酮溶液的方法进行。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，三维荧光光谱的采集方式和采集条件为：采用三维荧光光谱扫描，激发发射狭缝均为5nm，光电倍增管电压为600V，扫描速度为12000nm/min，每隔5nm取数据点，每个样品做3次平行扫描，取平均值。

6.根据权利要求1所述的方法，所述的步骤（3）中光谱数据预处理包括平滑与中心化。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述采用的化学计量学方法为三线性偏最小二乘法-判别式（PLSDA）和三线性偏最小二乘法（PLS）；PLSDA算法用于定性地筛分出阴性和阳性样品，PLS算法用于确定样品中磺胺甲基异恶唑和达氟沙星的浓度。

8.根据权利要求1所述的方法，所述的模型的验证采用交叉验证的方法建立校正模型，根据Hotelling T²和样品的剩余偏差去除异常点，再依据模型的预测误差最小化原则选择主成分数对未知样品进行预测。