[发明专利]一种同时测定牛奶中磺胺甲基异恶唑和达氟沙星的荧光方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种同时测定牛奶中两种抗生素的检测方法，特别的，涉及一种同时测定牛奶中磺胺甲基异恶唑和达氟沙星的荧光方法。

背景技术

近年来，随着我国居民收入的提高和对乳制品消费观念的转变，我国的乳制品工业得到了迅猛地发展。然而从目前国内奶业的生产与加工状况来看，我国乳制品的质量与安全现状不容乐观。我国乳牛的农场化养殖水平较低，大部分原料乳来自乳牛散养户，因此原料乳的品质波动性很大。乳制品掺假，滥用抗生素等诸多问题使得乳制品安全性存在重大隐患。

磺胺甲基异恶唑和达氟沙星分别属于磺胺类药物和喹诺酮类药物，这两类抗生素都具有广谱抗菌性，被广泛地用于治疗动物疾病（乳牛的乳房炎）和动物饲料添加剂中。如果对奶牛用药不当，滥用抗生素并不遵循休药期，牛乳中就会有抗生素残留。食用有抗生素残留的食品会给人体的健康带来严重的危害，如一些过敏反应和细菌耐药性，长期食用有致癌的可能性。许多国家都规定了牛奶中磺胺类药物和达氟沙星抗生素的允许的最大残留量分别为100μg/L和30μg/L。

中华人名共和国国家标准（GB/T 22966-2008和GB/T 21312-2007）分别规定了牛奶中磺胺类抗生素和喹诺酮类抗生素的液相色谱串联质谱测定方法。这种检测方法灵敏度高，但通常需要复杂的前处理，耗时较长，费用昂贵。因此，迫切需要建立一种快捷简便的检测方法，以满足日常生产检验中对原料乳进行快速监测的需求，从而保证最终产品的质量。

荧光光谱法始于十九世纪六十年代，近年来，随着荧光分析法的发展，其应用范围日益广泛，具有灵敏度高、线性范围宽、不需复杂预处理等特点。随着技术的进步，荧光分析仪器的灵敏度，准确度和选择性不断提高，遍及工业，农业，食品，医药，环境科学的各个领域，成为一种重要且有效的痕量组分分析的方法。三维荧光光谱的三个维度是指激发波长、发射波长和荧光强度。三维荧光技术可为二阶校正法提供矩阵响应数据阵，能使我们在未知干扰物存在下，依然能对多个感兴趣的组分进行定量分析。选择覆盖感兴趣组分的最大荧光激发和发射波谱区间，对其进行三维荧光扫描，就可以为后期的数据分析提供完整的数据矩阵，对多种物质进行同时检测。已有研究表明结合三维荧光技术和化学计量学而建立的荧光检测方法具有直接检测复杂食品体系中痕量物质如抗生素残留的能力，但是目前还未有应用此种技术对食品中不同种类的抗生素残留同时检测的报道。

发明内容

针对上述情况，本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种快速同时测定牛奶中多类抗生素（磺胺类抗生素和喹诺酮类抗生素）残留的方法，可快速地筛分出阴性和阳性样品，并进一步确认其准确浓度，为实际应用提供了一种快捷简便的监控方法。

本发明通过以下方案实现：

一种同时测定牛奶中磺胺甲基异恶唑和达氟沙星的荧光方法，通过以下步骤实现：

（1）校正集样品制备：向阴性牛奶中添加一系列随机组合浓度梯度的磺胺甲基异恶唑和达氟沙星溶液。

（2）校正集样品的荧光测定：经过除蛋白质，加入荧光胺试剂衍生化后，采集三维荧光光谱。

（3）校正集模型的建立：对光谱数据预处理后，采用化学计量学方法的多元校正模型构建磺胺甲基异恶唑和达氟沙星两种物质的浓度和三维荧光光谱数据间的回归模型。

（4）模型的验证：采用交叉验证的方法建立校正模型；

（5）模型的预测能力：对未知样品采用与步骤（2）相同的预处理方法，采集其三维荧光光谱，收集到的光谱信息用步骤（4）获得的校正模型对其进行预测。

本发明牛奶样品的预处理为除脱蛋白质与荧光胺试剂衍生化，不包含其他化学分离。

本发明所述的除蛋白质采用加入30%（v/v）的三氯乙酸（TCA）溶液沉淀蛋白质的方法。

所述的荧光胺试剂衍生化采用1mg/mL荧光胺丙酮溶液的方法进行。

本发明三维荧光光谱的采集方式和采集条件为：采用三维荧光光谱扫描，激发发射狭缝均为5nm，光电倍增管电压为600V，扫描速度为12000nm/min，每隔5nm取数据点，每个样品做3次平行扫描，取平均值。

所述的步骤（3）中光谱数据预处理包括平滑与中心化。

所述采用的化学计量学方法为三线性偏最小二乘法-判别式（PLSDA）和三线性偏最小二乘法（PLS）；PLSDA算法用于定性地筛分出阴性和阳性样品，PLS算法用于确定样品中磺胺甲基异恶唑和达氟沙星的浓度。