[发明专利]一种血液同型半胱氨酸的检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种血液同型半胱氨酸的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）准备工作：将HCY标准品用缓冲液溶解分别配置浓度为50μmol/L、25μmol/L、10μmol/L、5μmol/L、2.5μmol/L、0 μmol/L的HCY溶液，临用前15分钟内配制；将还原剂用缓冲液溶解配制成浓度为1μmol/L还原剂工作液；将HCY特异性转化酶用缓冲液配制成浓度为0.4-0.6mg/ml的HCY特异性转化酶工作液；

（2）检测：在96孔板中分别加入HCY 标准品和样品，加入还原剂工作液还原1h；加入HCY特异性转化酶工作液反应5min；加入显色液A, 反应5min；加入显色液B, 反应10min；

（3）标准曲线制备：根据标准品浓度溶液在670nm的吸光度值制备标准曲线，然后计算样品中HCY含量；或根据标准品浓度溶液在激发波长615nm，发射波长685nm的荧光强度制备标准曲线，计算样品中HCY含量。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述HCY特异性转化酶为阴道毛滴虫（Trichomonas vaginalis）的甲硫氨酸γ-裂解酶。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述还原剂为二硫苏糖醇。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述缓冲液为250mM的磷酸盐缓冲溶液，pH为8.3，其中含磷酸吡多醛的浓度为10uM，Triton X-100的浓度为0.05wt% ，三羧乙基膦的浓度为1mM。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述显色液A为浓度为1.5 M 的H₂SO₄溶液，其中含二甲基对苯胺浓度为20mM。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述显色液B为20mM磷酸缓冲液，其中含铁氰化钾浓度为5mM。

7.根据权利要求1所述检测方法制备的血液同型半胱氨酸检测试剂盒，其特征在于，此试剂盒包括盒体以及在盒体内的96孔板、HCY标准品、HCY特异性转化酶、还原剂、缓冲液、显色液A和显色液B。

8.根据权利要求7所述的检测试剂盒，其特征在于，所述HCY特异性转化酶为阴道毛滴虫（Trichomonas vaginalis）的甲硫氨酸γ-裂解酶，所述还原剂为二硫苏糖醇，所述缓冲液为250mM的磷酸盐缓冲溶液，pH为8.3，其中含磷酸吡多醛的浓度为10uM，Triton X-100的浓度为0.05wt% ，三羧乙基膦的浓度为1mM，所述显色液A为浓度为1.5 M 的H₂SO₄溶液，其中含二甲基对苯胺浓度为20mM，所述显色液B为20mM磷酸缓冲液，其中含铁氰化钾浓度为5mM。