[发明专利]一种半乳糖凝集素-3结合蛋白及其制备和应用

权利要求书

1.一种半乳糖凝集素-3结合蛋白，其特征在于：半乳糖凝集素-3结合蛋白为序列表SEQ ID No.1中的氨基酸序列所示。

2.一种权利要求1所述半乳糖凝集素-3结合蛋白的制备，其特征在于：

1）质粒pETG3BP的构建：

以半滑舌鳎cDNA为模板，用引物F1和R1进行PCR扩增，PCR产物纯化后与T-Simple连接，连接混合液转化大肠杆菌后在含安卡青霉素、Xgal、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷的LB培养基上培养2－8h,筛选转化子提取质粒，得重组质粒pTSG3BP；

将pTSG3BP用Sma I酶切，回收1.6kb片段，连接于pET259，连接液转化入大肠杆菌，在含卡那霉素的LB培养基上培养18－24小时,筛选转化子提取质粒，即为pETG3BP；

2）半乳糖凝集素-3结合蛋白的制备

将上述步骤1）的质粒pETG3BP转化BL21(DE3)，在含有卡那霉素的LB培养基上培养,筛选转化子即为BL21/pETG3BP；将BL21/pETG3BP用终浓度为1mM的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达后，采用亲和层析柱纯化重组蛋白，即为序列表SEQ ID No.1中的氨基酸序列所示的半乳糖凝集素-3结合蛋白。

3.按权利要求2所述的半乳糖凝集素-3结合蛋白的制备，其特征在于：所述步骤1）中F1为5’-CCCGGGGCCACCATGGCTTTTACATTTGACCTGTTC-3’；R1为5’-CCCGGGGACTCGGACGTACACTGGTCT-3’。

4.一种权利要求1所述的半乳糖凝集素-3结合蛋白的应用，其特征在于：所述半乳糖凝集素-3结合蛋白能够结合细菌，继而作为细菌的抑制剂。

5.按权利要求4所述的半乳糖凝集素-3结合蛋白的应用，其特征在于：所述半乳糖凝集素-3结合蛋白能够结合革兰氏阴性细菌或革兰氏阳性细菌。

6.按权利要求5所述的半乳糖凝集素-3结合蛋白的应用，其特征在于：所述革兰氏阴性细菌为荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）、迟缓爱德华氏菌（Edwardsiella tarda）、大肠杆菌（Escherichia coli）或鳗弧菌（Vibrio anguillarum）；革兰氏阳性细菌为海豚链球菌（Streptococcus iniae）或枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。