[发明专利]一种半乳糖凝集素-3结合蛋白及其制备和应用

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体的说是一种半乳糖凝集素-3结合蛋白及其制备和应用。 

背景技术

半乳糖凝集素-3结合蛋白(galectin-3 binding protein,G3BP)是一种分泌至胞外的糖蛋白，它能够结合半乳糖凝集素-3（galectin-3）以及其它胞外蛋白，如胶原蛋白（collagen）、纤维连接蛋白（fibronectin）、β1整合蛋白（β1 integrins）等。目前研究最多的是人类G3BP，发现它在分子结构上含有一个清道夫受体（Scavenger receptor）功能域，该功能域与靶分子结合有关。人类G3BP在免疫组织和细胞中表达，并且在病毒感染以及某些癌症病人血清中表达上调，因此可能参与机体的免疫抵抗、炎症反应、肿瘤发生等过程。迄今G3BP只在两种鱼类（斑马鱼和大西洋鲑）中发现，但其功能则完全未知。 

发明内容

本发明目的在于提供一种半乳糖凝集素-3结合蛋白及其制备和应用。 

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为： 

一种半乳糖凝集素-3结合蛋白，半乳糖凝集素-3结合蛋白为序列表SEQ ID No.1中的氨基酸序列所示。 

半乳糖凝集素-3结合蛋白的制备， 

1）质粒pETG3BP的构建： 

以半滑舌鳎cDNA为模板，用引物F1和R1进行PCR扩增，PCR产物纯化后与T-Simple连接，连接混合液转化大肠杆菌后在含安卡青霉素、Xgal、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷的LB培养基上培养2－8h,筛选转化子提取质粒，得重组质粒pTSG3BP； 

将pTSG3BP用Sma I酶切，回收1.6kb片段，连接于pET259，连接液转化入大肠杆菌，在含卡那霉素的LB培养基上培养18－24小时,筛选转化子提取质粒，即为pETG3BP； 

2）半乳糖凝集素-3结合蛋白的制备 

将上述步骤1）的质粒pETG3BP转化BL21(DE3)，在含有卡那霉素的LB培养基上培养,筛选转化子即为BL21/pETG3BP；将BL21/pETG3BP用终浓度为1mM的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达后，采用亲和层析柱纯化重组蛋白，即为序列表SEQ ID No.1中的氨基酸序列所示的半乳糖凝集素-3结合蛋白。 

所述步骤1）中F1为5’-CCCGGGGCCACCATGGCTTTTACATTTGACCTGTTC -3’；R1为5’-CCCGGGGACTCGGACGTACACTGGTCT-3’。 

半乳糖凝集素-3结合蛋白的应用，所述半乳糖凝集素-3结合蛋白能够结合细菌，继而作为细菌的抑制剂。 

所述半乳糖凝集素-3结合蛋白能够结合革兰氏阴性细菌或革兰氏阳性细菌。 

所述革兰氏阴性细菌为荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）、迟缓爱德华氏菌（Edwardsiella tarda）、大肠杆菌（Escherichia coli）或鳗弧菌（Vibrio anguillarum）；革兰氏阳性细菌为海豚链球菌（Streptococcus iniae）或枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。 

本发明具有如下优点：本发明的半乳糖凝集素-3结合蛋白能够与多种革兰氏阴性细菌和革兰氏阳性细菌显著性结合。本发明所得自半滑舌鳎中克隆获得了G3BP，其与多种细菌具有显著性结合能力，本发明乳糖凝集素-3结合蛋白能够与多种革兰氏阴性细菌和革兰氏阳性细菌显著性结合；因此该蛋白具有在抗细菌感染中应用的潜能。 

附图说明

图1为本发明实施例提供的纯化得到的半乳糖凝集素-3结合蛋白电泳图谱（其中，纯化得到的半乳糖凝集素-3结合蛋白为泳道2；泳道1：分子量marker）。 

图2为本发明实施例提供的半乳糖凝集素-3结合蛋白与各种细菌的结合能力检测结果。 

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明。实施例旨在对本发明进行举例描述，而非以任何形式对本发明进行限制。 

在本发明实施例中所涉及到的常规性实验方法均采用如下方法： 

1.质粒提取、DNA(PCR)产物纯化、DNA片段从凝胶中回收皆使用“天根生化科技(北京)有限公司”的相应试剂盒。