[发明专利]具抗肿瘤活性的氮取代鬼臼类衍生物及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及鬼臼毒素类衍生物，尤其涉及4′-去甲基表鬼臼毒素的C环4位取代后所得到的氮取代鬼臼类衍生物及其制备方法，本发明还涉及所述氮取代鬼臼类衍生物在制备抗肿瘤药物中的用途，属于鬼臼毒素类衍生物的制备及应用领域。

背景技术

鬼臼毒素(Podophyllotoxin)和4′-去甲基表鬼臼毒素(4′-Demethylepipodophyllotoxin)是从鬼臼类植物中（例如：小檗科植物桃儿七、山荷叶、八角莲等）提取得到的具有独特抗肿瘤活性的天然活性先导化合物。但是，鬼臼毒素(Podophyllotoxin)或4′-去甲基表鬼臼毒素均不同程度的存在着抗肿瘤活性较低等缺陷，严重限制了它们在临床上的使用。

发明内容

本发明目的之一提供具有抗肿瘤活性的氮取代鬼臼类衍生物；

本发明目的之二是提供一种制备或纯化所述氮取代鬼臼类衍生物的方法；

本发明目的之三是将所述氮取代鬼臼类衍生物应用于制备成临床用抗肿瘤药物；

本发明上述目的是通过以下技术方案来实现的：

具有抗肿瘤活性的氮取代鬼臼类衍生物，其结构式为式(Ⅴ)所示：

式(Ⅴ)

其中，R₁选自

此外，式（Ⅴ）化合物的酸成盐也当然包括在本发明的保护范围之内，优选的，所述的酸成盐包括盐酸盐或磷酸盐等酸成盐。

苯并咪唑，咪唑，噻吩等是抗肿瘤药物的医药中间体，这些杂环类化合物含有氧、氮、硫这一类活性原子，这些活性原子有可能增强化合物与拓扑异构酶Ⅱ的结合能力，使其更好的作用于拓扑异构酶Ⅱ的活性位点从而使药物的抗肿瘤活性提高。本发明根据药物拼合原理，以这些化合物为母核的衍生物苯并咪唑、咪唑-3-丙烷胺以及噻吩-2-甲胺作为4′-去甲基表鬼臼毒素结构修饰的功能基团。相对于杂环而言，烷烃缺少氧、氮、硫这一类活性原子，不利于化合物与拓扑异构酶Ⅱ的结合，但也不会由于极性过大而与酶的活性位点发生排斥。为比较不同的电负性基团对4′-去甲基表鬼臼毒素活性的影响，本发明还选择了三羟甲基氨基甲烷作为4′-去甲基表鬼臼毒素结构修饰的功能基团，将1-(3-氨基丙基)咪唑、苯并咪唑、2-噻吩甲胺或三羟甲基氨基甲烷引入到4′-去甲基表鬼臼毒素的C环4位，得到本发明式(Ⅴ)所示的化合物。

本发明目的之二是提供一种制备上述式(Ⅴ)化合物的方法，该方法包括以下步骤：通过氮取代反应，将1-(3-氨基丙基)咪唑、苯并咪唑、2-噻吩甲胺或三羟甲基氨基甲烷引入到4′-去甲基表鬼臼毒素的C环4位，即得式(Ⅴ)化合物。

所述的氮取代反应优选在以下条件下进行：（1）将4′-去甲表鬼臼毒素的C环4位活化；（2）将C环4位活化后的4′-去甲表鬼臼毒素溶于有机溶剂中，加入1-(3-氨基丙基)咪唑、苯并咪唑、2-噻吩甲胺或三羟甲基氨基甲烷，搅拌进行氮取代反应。

其中，4′-去甲表鬼臼毒素C环4位的活化方式可以采用对甲基苯环酰氯对4′-去甲表鬼臼毒素C环4位进行活化；更优选的，所述的活化方式包括以下步骤：将4’-去甲基表鬼臼毒素干燥后在氮气保护下，冰浴下边搅拌边滴加对甲基苯磺酰氯再滴加三乙胺；加料完毕后，撤去冰浴，20-25℃反应1-5小时。

步骤（2）中所述的有机溶剂优选为乙腈；

为了达到更好的合成效果，在氮取代反应中，4′-去甲表鬼臼毒素与1-(3-氨基丙基)咪唑、苯并咪唑、2-噻吩甲胺或三羟甲基氨基甲烷的摩尔比优选为1∶3。

步骤（2）所述的搅拌优选为在真空条件下进行搅拌，其搅拌转速优选为50-800转/分钟，更优选为600转/分钟；所述的氮取代反应温度优选为80℃；所述的氮取代反应时间优选为24-48小时，更优选为48小时。

为了达到更好的技术效果，可以将上述反应产物在以下条件下进行初步纯化得到初步纯化的氮取代鬼臼类衍生物产物：

将反应产物旋转蒸发浓缩，用乙酸乙酯提取过滤得滤渣，再用体积比为1：1的二氯甲烷：甲醇复溶，真空干燥，得到初步纯化的氮取代鬼臼类衍生物产物。

本发明还提供了一种将上述初步纯化的硫取代鬼臼类衍生物产物进一步纯化的方法，包括：

(1)待分离纯化样品的制备：将初步纯化的氮取代鬼臼类衍生物产物通过乙酸乙酯溶剂溶解，并用水反复洗涤，收集有机层，真空干燥，备用；

(2)分离纯化：将步骤（1）所制备的样品依次使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离，即得。