[发明专利]一种基于化学衍生的尿液中甾体激素的检测方法

权利要求书

1.一种基于化学衍生的尿液中甾体激素的检测方法，其特征在于：采用4-二甲胺基苯甲酸作为衍生化试剂进行酯化，液相色谱-质谱联用检测衍生化后的甾体激素，包括以下步骤：

第一步，收集尿液，离心除杂质后保存；

第二步，取第一步得到的尿液，采用SPE柱提取其中的甾体激素；

第三步，过SPE柱的洗脱液进行冷冻干燥；

第四步，在冷冻干燥的离心管内，加入4-二甲氨基苯甲酸（DMAB）、4-二甲氨基吡啶（DMAP）和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺（EDC）的二氯甲烷溶液，涡旋混匀，转移至玻璃进样小瓶中，盖上瓶盖密封，水浴加热进行衍生化，然后蒸干二氯甲烷溶液；

第五步，加溶解液涡旋溶解残渣，等待液相色谱-质谱联用进样分析；

第六步，进行液相色谱-质谱联用检测分析甾体激素。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，第一步中，所述的离心后尿样的保存温度为-20℃。

3.根据权利要求1或2所述一种基于化学衍生的尿液中甾体激素的检测方法，其特征在于，第二步中，以所用尿液体积为500μL为基准，SPE柱为Waters Oasis HLB柱，填料量为30mg，洗脱步骤为：

1）SPE柱先用1.5-3mL甲醇平衡；

2）然后用1.5-3mL去离子水水洗；

3）上样：在500μL尿液中加入50μL水和450μL甲醇，并将这1mL的溶液上样至SPE柱上；

4）淋洗：正压条件下用1mL45％甲醇溶液淋洗，重复淋洗共3次；

5）洗脱：正压条件下用1.5mL90％甲醇溶液进行洗脱。

4.根据权利要求1所述一种基于化学衍生的尿液中甾体激素的检测方法，其特征在于，第四步中，所用的DMAB和DMAP的二氯甲烷溶液浓度为2mg/mL，EDC的二氯甲烷溶液浓度为5mg/mL，加入体积均为80μL。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，第四步中，水浴加热进行衍生化温度为65-75℃，水浴时间为4-6小时，水浴蒸干二氯甲烷的温度为40-50℃。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，第五步中，溶解残渣所用溶液为200μL50％乙腈/水溶液，涡旋时间为1分钟。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，第五步中，液相色谱-质谱联用进样分析的体积为20μL。

8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，第三步中，冷冻干燥时间为3-5小时。

9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，第一步，尿液置于低温高速离心机中离心10min去除杂质后保存，低温高速离心机转速为10000转/分钟，温度4℃。