[发明专利]一种定量检测MPL基因W515位点突变的试剂盒

权利要求书

1.一种检测MPL基因W515位点突变的试剂盒，包括检测用引物、荧光探针、荧光定量PCR混合液、阴性对照和阳性对照，其特征在于，所述检测用引物、荧光探针包括MPL基因W515L位点突变特异性引物和MPL基因W515K位点突变特异性引物中的至少一种和内参基因ABL引物及Taqman荧光探针，其中：

MPL基因W515L位点突变特异性上游引物序列如序列表中SEQ ID NO:1所示；

MPL基因W515L位点突变特异性下游引物序列如序列表中SEQ ID NO:2所示；

MPL基因W515L位点突变特异性Taqman荧光探针如序列表中SEQ ID NO:3所示；

MPL基因W515K位点突变特异性上游引物序列如序列表中SEQ ID NO:4所示；

MPL基因W515K位点突变特异性下游引物序列如序列表中SEQ ID NO:5所示；

MPL基因W515K位点突变特异性Taqman荧光探针如序列表中SEQ ID NO:6所示；

ABL基因上游引物序列如序列表中SEQ ID NO:7所示；

ABL基因下游引物序列如序列表中SEQ ID NO:8所示；

ABL基因Taqman荧光探针如序列表中SEQ ID NO:9所示 。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括内部阳性控制序列、内部阳性控制序列的引物和Taqman荧光探针，其中：内部阳性控制序列如序列表中SEQ IDNO:10所示；内部阳性控制序列的上游引物如序列表中SEQ ID NO:11所示；内部阳性控制序列的下游引物如序列表中SEQ ID NO:12所示；内部阳性控制序列的Taqman荧光探针如序列表中SEQ ID NO:13所示。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述MPL基因W515L位点突变特异性Taqman荧光探针、MPL基因W515K位点突变特异性的Taqman荧光探针和ABL基因的Taqman荧光探针的5’端连接有荧光报告基团FAM，3’端均连接有荧光淬灭基团TAMRA；所述内部阳性控制序列的Taqman荧光探针的5’端连接有荧光报告基团TET，3’端连接有荧光淬灭基团TAMRA。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述内参基因ABL的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:14所示。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述阴性对照为去离子水；所述阳性对照为含有MPL基因W515L位点突变和MPL基因W515K位点突变的基因组DNA样品。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光定量PCR的混合液为：1×的 PCR预混合液、2.5-4.0mM的Mg²⁺、0.2-0.4mM的dNTPs、0.3-0.6mM的dUTP、0.2U/μL的Taq酶、0.01-0.05U/μL的UNG酶和无RNase去离子水。