[发明专利]一种合成利那洛肽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药合成领域，具体涉及一种合成利那洛肽的方法。

背景技术

利那洛肽（Linaclotide）是一种新型GC-C（肠上皮细胞尿苷酸环化酶C）受体激动剂，该化合物为14个氨基酸组成的多肽,通过固相合成技术得到。利那洛肽可激活肠上皮细胞顶端表面的GC-C受体，导致细胞内和细胞外环鸟苷酸增多。其净效应是氯和碳酸氢盐分泌进入肠腔增加，进而导致液体分泌增多以及大便通过加速，用于治疗成人慢传输型便秘和便秘型肠易激综合征（IBS-C）患者，结构序列为：

NH₂-Cys-Cys-Glu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys-Tyr-COOH（3对二硫键为1-6、2-10、5-13）。

关于利那洛肽的制备方法，国内外均没有专利报道，仅有Miriam等人发表一篇文献尝试了利那洛肽的合成（Optimized Fmoc Solid-Phase Synthesis of the Cysteine-Rich Pertide Linaclotide，Published online 4 August 2010 in Wiley Online Library）。文献中分别采用了三种方法进行合成：（1）采用Trt为Cys保护基固相合成线性粗肽，然后在液相中室温一步氧化得到利那洛肽；（2）分别采用Trt，Acm为Cys保护基固相合成线性粗肽，然后采用半选择性策略完成二硫键的合成；（3）分别采用Mmt，Acm，Trt或Acm，Trt，pMeOBzlm为Cys保护基固相合成线性粗肽，然后采用完全选择性策略完成二硫键的合成。但是，方法2、3使用了多种侧链脱除和氧化试剂，每一个步骤必然带来杂质的增多，因此不利于得到高纯度，高收率的产物，也不利于工艺的放大。

方法1虽然过程步骤简单，只使用了一种保护基保护半胱氨酸侧链巯基，但是半胱氨酸侧链保护基的选择是影响利那洛肽合成的关键因素之一，方法1选用的Trt保护基不利于利那洛肽线性粗肽纯度的提高，造成线性粗肽纯度较低，往往需要纯化才能进行利那洛肽3对二硫键的环化，不利于大规模生产。

此外，方法1在最后一步的氧化形成利那洛肽粗品过程中，采用GSH（还原性谷胱甘肽）氧化体系进行3对二硫键的环化，但是该氧化体系不能准确定位3对二硫键的位置，极易造成大量杂质的产生，造成利那洛肽粗品纯度较低，不利于后续的纯化和总收率。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种合成利那洛肽的方法，使得本发明所述方法能够提高利那洛肽线性粗肽纯度以及利那洛肽粗品纯度和总收率。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种合成利那洛肽的方法，包括以下步骤：

步骤1、固相合成在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列N端、Thr侧链上、Cys侧链上、Asn侧链上、Tyr侧链上、Glu侧链上偶联有保护基以及在C端偶联有树脂固相载体的利那洛肽树脂，所述Cys侧链上偶联的保护基为Mmt保护基；

步骤2、利那洛肽树脂裂解脱除所有保护基和树脂固相载体得到利那洛肽线性粗肽，然后采用GSH/GSSH氧化体系对利那洛肽线性粗肽进行氧化反应，按照其N端到C端的氨基酸顺序，形成第1位Cys和第6位Cys的二硫键、第2位Cys和第10位Cys的二硫键以及第5位Cys和第13位Cys的二硫键得到利那洛肽粗品，纯化后即得利那洛肽。

其中，所述树脂固相载体优选为王树脂，更优选为替代度为1.0mmol/g的王树脂。GSH/GSSH氧化体系所指为还原型谷胱甘肽（GSH）和氧化性谷胱甘肽（GSSH）联合使用的氧化体系。

本发明采用一步氧化方法制备利那洛肽，避免了不同氧化方法带来的杂质。同时，本发明采用Mmt作为Cys的侧链保护基团能够极大的提高线性粗肽的纯度，使线性粗肽不经过纯化直接应用于下一步的氧化过程中。而且，采用GSH/GSSH体系能够极大的降低线性粗肽中的杂质，有利于下一步纯化过程。

在本发明所述方法中，以利那洛肽线性主链N端到C端的氨基酸顺序编号，如下式：