[发明专利]一种一步法乙肝病毒PreS1抗原酶联免疫测定试剂盒

权利要求书

1.一种“一步法乙肝病毒PreS1抗原酶联免疫测定试剂盒”，其特征在于该试剂盒包括：

(1)用亲和素先包被酶标板，并加入生物素标记的前S1单克隆抗体或抗HBS进行二次包被反应，制成抗体预包被反应条48-96孔；

(2)酶标记前S1抗体；

(3)阳性对照液1支、阴性对照液1支；

(4)20倍浓缩洗液1瓶；

(5)底物缓冲液甲1瓶；

(6)底物缓冲液乙1瓶；

(7)终止液(4N H2SO4)1瓶组成。

2.一种如权利1所描述的一种“一步法乙肝病毒PreS1抗原酶联免疫测定试剂盒”的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤：

(1)利用HBV-DNA重组PreS1 Ag基因片段通过原核表达或者真核表达制备抗原；

(2)制备抗体的制备和纯化：用上述重组抗原免疫豚鼠，得抗PreS1抗血清或免疫Balb/C小鼠得阳性鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞，筛选阳性克隆建株，得腹水；抗血清或腹水用盐析、离子交换层析、或者亲和层析法进行纯化，得纯抗PreS1抗体，其纯度95％以上，效价大于10万。

(3)用亲和素先包被酶标板，并加入生物素标记的抗乙肝病毒PreS1单克隆抗体或抗HBS进行二次包被反应，制成抗体预包被反应条48-96孔；

(4)辣根过氧化物酶(HRP)与纯化的抗乙肝病毒PreS1抗体酶联，制成酶标抗体；

(5)配制阳性对照液、阴性对照液；

(6)配制20倍浓缩洗液；

(7)配制底物缓冲液甲；

(8)配制底物缓冲液乙；

(9)配制终止液(2N H2SO4)。

(10)分装上述试剂盒除预报被板其余七种成分，按需要分装在小瓶或尖底离心管中；

(11)检定试剂盒的特异性、灵敏度、精密性、稳定性合格；

(12)组装成成品。

3.根据权利1所述的一种“一步法乙肝病毒PreS1抗原酶联免疫测定试剂盒”，其特征在于其中所述的抗体预包被反应条48-96孔、酶标记前抗体、阳性对照液为HBV-DNA和HBeAg均阳性血清，阴性对照液为正常人血清、浓洗涤液为磷酸-Tween-20缓冲液，底物缓冲液甲为H2O2、底物缓冲液乙为3.3’，5.5’-四甲基联苯胺和终止液为(4N H2SO4)。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述亲和素包被固相载体酶标板采用一下方法：用0.05M的pH值为4.5-5.0的柠檬酸缓冲液配制所需浓度的亲和素包被液，将包被液加入固相载体酶标上，并洗涤、封闭，再加入生物素化的乙肝病毒PreS1单克隆抗体或抗HBS抗体进行反应后，经洗涤、抽湿干燥后用铝箔袋密封。

5.如权利要求2所述方法，其特征在于，所述浓缩洗涤液配方为：含0.02MPBS、8.9％NaCl和0.5％Tween-20。