[发明专利]一种高特异高敏感检测食源性致病性耶尔森氏菌的方法

权利要求书

1.一种高特异高敏感检测食源性致病性耶尔森氏菌的方法,其特征在于，包括以下步骤：

步骤1）制备反应液

反应液组成及含量为

8u/ul Bst核酸聚合酶                          8u

10X耐热聚合酶反应缓冲液                 1X，MgSO4 2mM

4M 甜菜碱                                    1M

10mM d-NTP混合液                            400μM

内引物

   Y-FIP                                   40umol

   Y-BIP                                   40umol

外引物

   Y-F3                                    5umol

   Y-B3                                    5umol

标本核酸                                    20ng

添加焦碳酸二乙酯处理水至总量达到25ul;

步骤2）将上述反应液放入63℃烘箱进行反应30-60min，浑浊为阳性;

步骤3）提取临床分离空肠耶尔森氏菌，大肠耶尔森氏菌，以及若干临床分离金黄色葡萄球菌、头皮葡萄球菌、人型葡萄球菌、表皮葡萄球菌、草绿色链球菌、大肠杆菌、克雷伯菌的核酸，多次进行反应，观察它们的阴阳性。

2.根据权利要求1所述的高特异高敏感检测食源性致病性耶尔森氏菌的方法，其特征在于：所述外引物Y-F3的序列为TCTCACACACTAAAAACTGC。

3.根据权利要求2所述的高特异高敏感检测食源性致病性耶尔森氏菌的方法，其特征在于：所述外引物Y-B3的序列为ACCATATGGCTGGAACAAG。

4.根据权利要求3所述的高特异高敏感检测食源性致病性耶尔森氏菌的方法，其特征在于：所述内引物Y-FIP的序列为

TTGATTCGATTCACGGATTGCTTT-AAATAGCTATACCGATGTGACT。

5.  根据权利要求4所述的高特异高敏感检测食源性致病性耶尔森氏菌的方法，其特征在于：所述内引物Y-BIP的序列为ATTCCGTCAACTTGACAACCG-TGAACTGGCTAAACCTTTGT。

6.根据权利要求5所述的高特异高敏感检测食源性致病性耶尔森氏菌的方法，其特征在于：所述反应液中加入荧光显示物质溴化乙锭、钙黄绿素进行实时检查。

7.根据权利要求6所述的高特异高敏感检测食源性致病性耶尔森氏菌的方法，其特征在于：所述食源性致病性耶尔森氏菌包括空肠耶尔森氏菌和大肠耶尔森氏菌。