[发明专利]用于检测冬生疫霉的引物对和探针及其检测方法有效
| 申请号： | 201210385102.0 | 申请日： | 2012-10-11 |
| 公开（公告）号： | CN103725762A | 公开（公告）日： | 2014-04-16 |
| 发明（设计）人： | 杜洪忠;吴品珊 | 申请（专利权）人： | 中国检验检疫科学研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/645 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王朋飞;张庆敏 |
| 地址： | 100029 北京*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 检测 冬生疫霉 引物 探针 及其 方法 | ||
1.用于检测冬生疫霉的引物对，其特征在于，
上游引物PH-F：5’-CGACTTGCCACCGGGA-3’，
下游引物PH-R：5’-AACGGTACTTCTCTTTGCTCGAA-3’。
2.用于检测冬生疫霉的探针，其特征在于，所述探针为：5’-F1-TTCCACAACCAATTCCAT-Q1-3'，其中F1为报告荧光基团，Q1为非荧光性的淬灭基团。
3.根据权利要求2所述的探针，其特征在于，F1为FAM，Q1为MGB。
4.检测冬生疫霉的荧光RT-PCR法，其特征在于，以样品DNA为模板，采用权利要求1所述的引物对以及权利要求2或3所述的探针进行荧光RT-PCR反应，每个循环结束采集数据，反应结束后根据扩增曲线判定结果。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，25μL的反应体系含有成分如下：样品DNA 1μL(0.0005-50ng)，10×PCR反应缓冲液（不含Mg2+）2.5μL，25mM MgCL22.0μL，2.5mM dNTP 2.0μL，10μM引物PH-F 1μL，10μM引物PH-R 1μL，10μM探针1.5μL，5U/μL Taq DNA聚合酶0.3μL，ddH2O 13.7μL。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，反应程序为：95℃3min；95℃10s，60℃30s，40个循环。
7.用于检测冬生疫霉的试剂盒，其包括权利要求1所述的引物对以及权利要求2或3所述的探针。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括dNTPs、Taq DNA聚合酶、Mg2+、PCR反应缓冲液中的一种或多种。
9.根据权利要求7或8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括标准阳性模板。
10.含有权利要求1所述引物对的用于检测冬生疫霉的试剂盒。
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