[发明专利]一种基于DNA折纸的生物分子亲和常数测定方法

权利要求书

1.一种基于DNA折纸的生物分子的亲和常数测定方法，其特征在于，所述生物分子包括能够彼此结合与解离的反应物Ⅰ和反应物Ⅱ，该测定方法包括以下步骤：

（1）将反应物Ⅰ连接于DNA折纸订书钉链末端，然后和脚手架链自组装形成DNA折纸；

（2）加入反应物Ⅱ，反应达到平衡后利用原子力显微镜扫描成像收集数据，计算出反应物I和反应物Ⅱ复合物的浓度[AbAg]，游离的反应物Ⅰ的浓度[Ag]以及游离的反应物Ⅱ的浓度[Ab]；

（3）将步骤（2）所得数值代入如下公式，K＝[AbAg]/[Ag][Ab]，计算得到所述反应物Ⅰ和反应物Ⅱ的亲和常数K。

2.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述反应物Ⅰ和反应物Ⅱ包括：抗原和抗体，生物素和亲和素，核酸适配体及其靶分子以及配体和受体中的一组或几组。

3.如权利要求2所述的测定方法，其特征在于，所述反应物Ⅰ和反应物Ⅱ是地高辛和地高辛抗体。

4.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤（1）所述订书钉链和脚手架链自组装形成DNA折纸包括：将脚手架链与订书钉链混合后置于1×TAE/Mg²⁺缓冲液体系，其中所述订书钉链的末端连接有反应物Ⅰ，所述脚手架链与订书钉链的摩尔比为1:10～1:5，再置于PCR仪上从95℃退火至20℃，退火速度为0.1℃/10秒，即形成所述DNA折纸。

5.如权利要求4所述的测定方法，其特征在于，所述订书钉链和脚手架链自组装形成的DNA折纸是二维DNA折纸。

6.如权利要求5所述的测定方法，其特征在于，所述二维DNA折纸为100nm×70nm的矩形DNA折纸。

7.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤（2）所述原子力显微镜成像法包括以下步骤：将反应达到平衡的溶液滴加于云母片上进行吸附，将吸附完毕的云母片放置于注有缓冲液的液体槽中，置于原子力显微镜下，于液相轻敲模式进行扫描成像操作。

8.如权利要求7所述的测定方法，其特征在于，所述云母片是新解离的云母片，所述吸附的时间是2～5分钟。

9.如权利要求7所述的测定方法，其特征在于，所述缓冲液为1×TAE/Mg²⁺缓冲液，所述缓冲液的用量为30μL～50μL，所述的液体槽为配有细口径导管的两孔的液体槽。

10.如权利要求7所述的测定方法，其特征在于，所述原子力显微镜成像法为：使用小力成像；所述扫描的速率为1～3Hz，所述扫描的线数为256～512。