[发明专利]一种BDNA在尿液中检测PCA3的应用

说明书

技术领域

本发明涉及前列腺癌检测领域，尤其涉及一种BDNA在尿液中检测PCA3的应用。 

背景技术

目前，前列腺癌早期诊断方法及PCA3优势前列腺癌(PCa)是西方国家男性最常见恶性肿瘤，位于死亡原因第二位。随着我国人口老龄化、饮食结构西方化以及诊断技术的提高，PCa的发病率和诊断率逐年增加。 

诊断前列腺癌最常用的标记物是PSA，但PSA是前列腺组织特异性抗原，不是PCa特异性抗原，故良性前列腺增生、前列腺炎、急性尿潴留、前列腺的各种手术操作和检查均可引起血清PSA高，疾病特异性差。美国每4个血清PSA＞4ng/ml的老年男性中仅1人被穿刺活检证实为前列腺癌。还有约15％的PCa患者血清PSA小于4ng/mL。临床迫切需要一种肿瘤特异性标记物来诊断前列腺癌。而PCA3基因是PCa特异性基因，因此使用PCA3基因作为诊断PCa的肿瘤标记物将比PSA有更好的敏感性及特异性。 

PCA3定位于第9号染色体(9q21-22)，全长约25kb，包含3个内含子和4个外显子。研究表明PCA3是一种非编码RNA基因，其蛋白产物非常少，因此对PCA3的mRNA检测更具针对性。 

PCA3自从1999年首次被发现后经过了漫长的研究，目前国外对PCA3预测前列腺癌的敏感性和特异性是肯定的，它优于PSA。PCA3在前列腺癌组织中的特异性高表达使其成为一个前景广阔的前列腺癌标志物。但对PCA3高表达的机制、其生物学功能及PCA3在前列腺癌形成和疾病进展的关键生化途径中有何意义等方面仍存在许多未知的、需要探索的领域。在肿瘤诊断方面因为PCA3转录产物仅仅为十几kb的片段，而mRNA在一般环境和运输保存中容易降解，因此采用哪一种技术平台来检测PCA3是确保诊断准确可靠的关键。 目前国外检测PCA3主要有三种方式，PCR技术、TMA技术、和bDNA技术。前两种技术最大不确定性是核酸序列扩增带来的固有的假阳性和假阴性问题。因为该技术的放大是用引物扩增，需要扩增的区域是完整的，如标本中的RNA断裂和降解或变异就无法与引物结合，导致假阴性。bDNA技术(branched DNA，bDNA)是目前唯一被美国FDA批准用于艾滋病毒(HIV)和丙肝病毒(HCV)检测的最新技术，bDNA技术中使用的探针包括目标探针(target probe)、前放大体(preamplifier)、放大体(amplifier)、标记探针(label probe)。上述探针中只有目标探针需要针对不同的目的基因进行不同设计，后三种探针对任何基因的bDNA分析都是通用的。目标探针包含了多种针对PCA3基因不同片段的特异性探针，用于捕捉目标基因片段。放大探针是技术的关键。 

发明内容

本发明的目的为解决以上技术问题，提供一种灵敏度高、阳性检出率高、稳定性和可重复性好、操作简便、省时、易于普及的在尿液中检测PCA3的应用。 

为了解决上述技术问题，本发明提供的BDNA在尿液中检测PCA3的应用是这样实现的： 

一种BDNA在尿液中检测PCA3的应用，所采用的操作步骤为： 

(1)PCA3标本搜集

尿液PCA3检测使用标本为经直肠前列腺按摩后的尿液标本：

1)检查前饮水500ml有助于收集尿液标本；

2)前列腺指检后立即搜集尿液；

3)至少要20-30ml尿液，收集在贴好标签的杯子里，必须是最初排泄的尿液标本，保存尿液的尿杯里不应含任何防腐剂；

4)如果标本长期保存，应放-80℃，短期内检测放置-20℃保存。

(2)研究PCA3标本搜集 

1)研究利用PCA3作为靶标在前列腺癌诊断个体化评估中的可行性；

2)研究bDNA技术平台检测经直肠前列腺按摩后尿液中PCA3评分诊断前列腺癌的灵敏度、特异性、检测速度，以及是否便于通量检测；

3)研究不同临床分期和病理分级的前列腺癌患者PCA3评分变化是否有统计学差异和临床意义；

4)研究PCA3评分，作为前列腺癌进展及预后评判指标和前列腺癌治疗后监测指标的可行性；

5)研究中国人PCA3的ROC曲线以及评分标准和诊断阈值；

6)研究PCA3异构体在中国前列腺癌患者人群的表达以及在不同病理分级的肿瘤标本中是否有差异表达；

7)研究PCA3不同异构体表达下，雄激素受体异构体表达情况，分析两者是否有相关性。

(3)利用BDNA技术检测：