[发明专利]调整反应细胞浓度的流式细胞测速方法

权利要求书

1.调整反应细胞浓度的流式细胞测速方法，其特征在于，它包括如下步骤：

（1）准备抗凝新鲜正常人外周血0.5mL，动员后外周血采集液0.5mL；

（2）流式细胞仪开机后首先进行仪器质控，保持电子仪器工作状态稳定；

（3）取正常人外周血50μL加500μl生理盐水放入同一上机管中，采用流式细胞仪的中档进行测速，反复10次，记录每秒通过的细胞数，绘出测速所得的上下限范围；

（4）取动员后外周血采集液50μL加500μL生理盐水放入同一上机管中，采用流式细胞仪中档进行测速，反复10次，记录每秒通过的细胞数；

（5）将步骤（4）的得到的细胞数数据与步骤（3）得到的细胞数数据进行比对，确定动员后外周血采集液在造血干细胞CD34绝对计数分析中应稀释的倍数；

（6）取稀释的动员后外周血采集液50μL加500μL生理盐水放入同一上机管中，采用流式细胞仪中档进行测速，当采集液最终的细胞数落在步骤第（3）测速所得的上下限范围内时，则该浓度采集液就可以进行造血干细胞CD34绝对计数的实验；

（7）进行造血干细胞CD34绝对计数的常规操作流程。

2.根据权利要求1所述的调整反应细胞浓度的流式细胞测速方法，其特征在于，步骤（5）中，动员后外周血采集液在造血干细胞CD34绝对计数分析中应稀释的倍数的计算方法为：步骤（4）得到的外周血采集液每秒通过的细胞数除以步骤（3）得到的正常人外周血每秒通过的细胞数，结果取整数即为稀释的倍数。

3.根据权利要求1所述的调整反应细胞浓度的流式细胞测速方法，其特征在于，步骤（7）中，造血干细胞CD34绝对计数的常规操作流程包括如下步骤：

（7a）分别向已编好号的试管中加入单克隆抗体CD45和CD34试剂各5μL，加步骤（6）确定好的取稀释后的动员后外周血采集液50μL，混匀室温避光反应20分钟；

（7b）加OPTILYSE 250μL，混匀室温避光放置10分钟；

（7c）加pH7~7.2的PBS缓冲液250μL，静置5分钟；

（7d）加FLOW COUNT 50μL；

（7e）上流式细胞仪检测。