[发明专利]适用于黄瓜花叶病毒不同亚组株系基因组的通用引物及扩增方法

权利要求书

1.一种适用于黄瓜花叶病毒不同亚组株系基因组的通用引物，其特征在于：该通用引物的名称和核苷酸序列如下：

P11：GTTTATTTACAAGAGCGTACGGTTCAA；

P12：CATGTGATGGGGGAACGTGT；

P21：GAGAAGAATGGGACGTGATATCATC；

P22：TGGTCTCCTTTTGGAGGCCCC；

P11：GTTTATTTACAAGAGCGTACGGTTCAA；

P31：CGTTCTCGAAGGCATCTCTGG；

P41：CGATTCCAGAGATGCCTTCG；

P42：GTTTTCCCAGTCACGACTGGTCTCCTT；

P51：GTAATCTTACCACTGTGTGTGTGCG；

P52：ACGGTAGAATCAAATTTCGGCAA；

P61：CGCTCGCCTGTTGAAGTCG；

P42：GTTTTCCCAGTCACGACTGGTCTCCTT。

2.根据权利要求1所述的适用于黄瓜花叶病毒不同亚组株系基因组的通用引物，其特征在于：引物配对方式如下：

P11和P12配对；P21和P22配对；P11和P31配对；P41和P42配对；P51和P52配对；P61和P42配对。

3.一种利用权利要求1所述的通用引物扩增CMV不同亚组株系基因组序列的方法，其特征在于：具体步骤如下：

(1)提取样品RNA，以其为模板，以本发明提供的引物，使用一步法RT-PCR进行扩增；

(2)PCR产物琼脂糖胶电泳检测，根据产物条带有无和大小判断样品是否有CMV感染，目的条带回收，连接T载体，转化细菌感受态细胞；

(3)进行蓝白斑筛选和PCR鉴定，确定阳性菌株，阳性菌株放大培养后，提取质粒；

(4)阳性质粒测序，结果分析，确定是否为CMV，测序结果经过拼接，得到CMV基因组全序列。

4.根据权利要求3所述的利用通用引物扩增CMV不同亚组株系基因组序列的方法，其特征在于：步骤（1）中的RT-PCR 25μl体系为：

反应组分组分体积反应酶1μl反应缓冲液12.5μl上游引物(20 μM)0.5μl下游引物(20 μM)0.5μlRNA0.3-1μl去RNA酶H2O10μl总体积        25μl

RT-PCR反应条件为：50℃ 30min，94℃ 3min，94℃ 30sec，53-58℃ 30sec，72℃ 2min，28-35个循环，72℃ 10min，4℃保存。