[发明专利]双束激光质谱法原位检测动物组织中药物分子的方法

权利要求书

1.一种应用双束激光质谱法原位检测动物组织中药物分子的方法，其特征在于包括以下操作步骤：

（1）将药物分子溶液加到离体肿瘤组织上，使药物分子溶液在离体肿瘤组织中充分扩散；

（2）将经过步骤（1）处理的离体肿瘤组织进行冷冻，用包埋剂将离体肿瘤组织包埋后，用冷冻切片机进行切片，得到离体肿瘤组织切片；

（3）对承载基底石墨棒进行清洗处理，将步骤（2）处理所得离体肿瘤组织切片放在已处理的石墨棒上，把石墨棒固定在双束激光质谱仪的进样杆上，经进样系统进入双束激光质谱仪的电离室中进行检测；

（4）开启双束激光质谱仪，双束激光质谱仪中的两台固体激光器分别依次发射脉冲激光，发射的第一束脉冲激光为解析激光，解析激光聚焦后进入电离室中并且照射在石墨棒上的离体肿瘤组织切片上，经过18～30μs延迟，再发射第二束脉冲激光，第二束脉冲激光经过气体池三倍频后转化为真空紫外激光，在气体池出光口用平凸镜聚焦分离第二束脉冲激光和真空紫外激光；真空紫外激光聚焦后以平行于石墨棒的方向进入电离室中并且与第一束脉冲激光实现交叉，再对第一束脉冲激光气化-解析后产生的气羽进行电离，电离的离子经过飞行管飞行，被微通道板检测，再通过数据采集装置显示及采集，最后在电脑上进行数据处理。

2.根据权利要求1所述的一种应用双束激光质谱法原位检测动物组织中药物分子的方法，其特征在于：所述步骤（1）是在无菌条件下进行操作的；步骤（1）所述离体肿瘤组织为被Hela细胞感染的老鼠的皮下离体肿瘤组织；所述离体肿瘤组织的大小为15mm×5mm×4mm；所述药物分子溶液的浓度为1×10^-4mol/L，其用量为10～100μl；所述充分扩散的时间是10～20min。

3.根据权利要求1所述的一种应用双束激光质谱法原位检测动物组织中药物分子的方法，其特征在于：步骤（1）所述药物分子溶液是亚甲基蓝溶液。

4.根据权利要求1所述的一种应用双束激光质谱法原位检测动物组织中药物分子的方法，其特征在于：步骤（2）所述进行冷冻是先将经过步骤（1）处理的离体肿瘤组织投入用干冰冷却的异戊烷中15～20s，再放入-80℃的冰箱里冷冻保存；所述包埋剂是OCT冰冻切片包埋剂；所述冷冻切片机是在-19～-24℃的环境下工作，冷冻切片机工作前提前开机1.5～2.0小时；所述切片的厚度为200～400μm。

5.根据权利要求1所述的一种应用双束激光质谱法原位检测动物组织中药物分子的方法，其特征在于：步骤（3）所述石墨的纯度为99.999%；所述清洗处理是将石墨分别在乙醇和超纯水中进行超声清洗，清洗是在20～50KHz下处理20～40min。

6.根据权利要求1所述的一种应用双束激光质谱法原位检测动物组织中药物分子的方法，其特征在于：步骤（4）所述第一束脉冲激光的波长为1064nm；所述第二束脉冲激光出固体激光器时的波长为355nm，经过气体池三倍频后转化为真空紫外激光时的波长为118nm；

所述飞行管长度为1.5m；

所述气体池为30cm高，底部直径7cm的圆柱型金属管；所述气体池中的配气为体积比1:10的氙气和氩气混合气体；所述气体池中的气压为200torr；

所述平凸镜为MgF₂平凸透镜，其凸面对着气体池，斜度为8°，直径25.4mm，焦距75mm；

所述飞行管和真空设备中的真空度为1×10^-6～1×10^-5pa；

所述数据采集装置是采用安捷伦的示波器，采集的平均次数为512次；

所述电脑是利用Origin软件进行数据处理。

7.根据权利要求1所述的一种应用双束激光质谱法原位检测动物组织中药物分子的方法，其特征在于：步骤（4）所述实现交叉是实现垂直交叉。

8.根据权利要求1所述的一种应用双束激光质谱法原位检测动物组织中药物分子的方法，其特征在于：步骤（4）所述固体激光器发射脉冲激光的触发、延迟时间的设置和数据采集均是由数字延时发生器来控制的。

9.一种实现权利要求1～8任一项所述方法的双束激光质谱仪，其特征在于：所述双束激光质谱仪包括数字延时发生器、进样系统、固体激光器、真空系统、气体池、平凸镜、数据采集装置和数据处理装置；所述真空系统包括电离室、飞行管和微通道板，飞行管的一端连接着电离室，另一端设置微通道板微通道板；所述固体激光器为两台，分别置于真空系统旁边，其中一台固体激光器与电离室之间设置气体池，在气体池靠近电离室的一侧设置平凸镜；所述数字延时发生器、固体激光器、微通道板、数据采集装置和数据处理装置依次电气连接。