[发明专利]一种恩拉霉素高产菌株及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种恩拉霉素高产菌株，其特征在所述菌株保藏名称是杀真菌链霉菌（Streptomyces fungicidious）DCS067，保藏单位CGMCC，保藏号是CGMCC No.6220，保藏日期2012年6月14日。

2.权利要求1所述恩拉霉素高产菌株的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

a、制备孢子悬液Ⅰ：取杀真菌链霉菌的出发菌株，接种于斜面培养基上，在28.0±0.5℃、相对湿度40-60%条件下培养5-8天，然后加入无菌水，将孢子刮下，混匀，得到孢子悬液Ⅰ；

b、有机溶剂处理：向孢子悬液Ⅰ中无菌有机溶剂，振荡后静置，分层，取水相得到孢子悬液Ⅱ；

c、紫外诱变：将孢子悬液Ⅱ置于灭菌的培养皿中，于波长254nm的紫外灯下照射45-60s；

d、抗性筛选：将诱变处理后的孢子悬液Ⅱ涂布在含有抗生素的分离培养基上，在28.0±0.5℃、相对湿度40-60%条件下培养5-8天，生成具有抗生素耐药性的若干单菌落；分别挑取上述单菌落，接种于斜面培养基上，在28.0±0.5℃、相对湿度40-60%条件下培养5-8天后，接种于种子培养基上，在28.0±0.5℃，200~220 rpm条件下培养26-30h后，接种于发酵培养基上，在28.0±0.5℃，200~220 rpm条件下培养9-12天，得到发酵液，测定发酵液中恩拉霉素效价，选取效价最高的发酵液对应的菌株即为杀真菌链霉菌（Streptomyces fungicidious）DCS067。

3.根据权利要求2所述恩拉霉素高产菌株的制备方法，其特征在于，所述孢子悬液Ⅰ中孢子浓度为1011-1013个/mL或吸光度A600为1.0-2.0，所述有机溶剂为苯酚、三氯甲烷、正十六烷、正己烷、正辛烷、正十二烷、正辛醇、二甲苯中的任意一种或几种的混合物。

4.根据权利要求3所述恩拉霉素高产菌株的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂是体积比为25:4的苯酚、三氯甲烷的混合物。

5.根据权利要求2或3所述恩拉霉素高产菌株的制备方法，其特征在于，按质量体积比计算，所述斜面培养基的成分为：0.5-1.0%麦芽糖粉，0.05-0.10%干酵母粉，0.05-0.10%金枪鱼膏，0.06-0.12%胰蛋白胨，0.1-0.5%氯化钠，1.8-2.2%琼脂，其余为水；所述分离培养中抗生素的含量为0.1~0.7μg /mL，其余成分及含量与斜面培养基相同，上述斜面培养基和分离培养基均采用质量百分含量为30%的NaOH水溶液调节pH至6.7±0.1。

6.根据权利要求5所述恩拉霉素高产菌株的制备方法，其特征在于，c步骤所述抗生素是链霉素。

7.根据权利要求2或3所述恩拉霉素高产菌株的制备方法，其特征在于，按质量体积比计算，d步骤所述种子培养基的成分为：2.5-4.5%玉米粉，0.2-0.8%玉米蛋白粉，0.2-0.8%棉籽饼粉，1.5-2.5%轻质碳酸钙，0.15-0.35%硫酸铵，0.02-0.05%硫酸亚铁，0.05-0.25%磷酸二氢钾，1.5-3.5%玉米浆，其余为水，该培养基采用质量百分含量为30%的NaOH水溶液调节pH至6.7±0.1。

8.根据权利要求2或3所述恩拉霉素高产菌株的制备方法，其特征在于，按质量体积比计算，d步骤所述发酵培养基的成分为：6-15%玉米粉，2-6%玉米蛋白粉，0.2-0.8%轻质碳酸钙，0.2-0.8%氯化钠，0.1-0.5%硫酸铵，0.003-0.012%硫酸亚铁，0.007-0.027%磷酸二氢钾，0.1-0.5%尿素，0.005-0.015%氯化锌，0.05-0.25%氢氧化钾，0.07-0.15%玉米浆，0.1-0.5%L-乳酸，0.04-0.12%耐高温α-淀粉酶，其余为水，该培养基采用质量百分含量为30%的NaOH水溶液调节pH至5.9±0.1。

9.权利要求1所述菌株在恩拉霉素生产中的应用。

10.根据权利要求9所述菌株在恩拉霉素生产中的应用，其特征在于，在28.0±0.5℃，200~220 rpm条件下，将DCS067菌株在发酵培养基中发酵9-12天，制得含有恩拉霉素的发酵液；所述发酵培养基的成分为：6-15%玉米粉，2-6%玉米蛋白粉，0.2-0.8%轻质碳酸钙，0.2-0.8%氯化钠，0.1-0.5%硫酸铵，0.003-0.012%硫酸亚铁，0.007-0.027%磷酸二氢钾，0.1-0.5%尿素，0.005-0.015%氯化锌，0.05-0.25%氢氧化钾，0.07-0.015%玉米浆，0.1-0.5%L-乳酸，0.04-0.12%耐高温α-淀粉酶，其余为水，该培养基采用质量百分含量为30%的NaOH水溶液调节pH至5.9±0.1。