[发明专利]一种检测异尖线虫病的免疫层析试条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物学领域，尤其涉及寄生虫疾病的检测技术，特别是一种检测异尖线虫病的免疫层析试条及其制备方法。

背景技术

异尖线虫病（anisakiasis），是人食用生的或未煮熟的含异尖线虫Ⅲ期幼虫的海鱼所导致的一种食源性寄生虫病。主要致病的虫种为简单异尖线虫(Anisakis simplex)和派氏异尖线虫(Anisakis pegreffii)。异尖线虫的成虫和幼虫形态不同，海鱼为异尖线虫Ⅲ期幼虫的第二中间宿主，故食用了含异尖线虫Ⅲ期幼虫的生海鱼，可导致异尖线虫病。

20世纪60年代首次报道人异尖线虫病以来，已在全球五大洲均有病例报告，其中大多数病例是来自日本、西班牙等有食生鱼习惯的国家。日本每年有2000例异尖线虫病报道，美国每年报道50例，欧洲每年报告500例。我国已于1993年将水生动物异尖线虫病列入了《中华人民共和国禁止进境的动物传染病、寄生虫病名录》。根据阮廷清对1982-2006年我国海鱼异尖线虫专项调查报告的数据进行统计分析显示，海鱼类总的感染率为47.10%，在沿海省市（如辽宁、河北、山东、上海、浙江、福建、广东、海南等）和岛屿均有调查和发现异尖线虫。且已从缅甸进口的带鱼、从印度尼西亚、加拿大和泰国进口的11种海鱼中发现了异尖线虫Ⅲ期幼虫。随着人们生食海鱼习惯的流行,异尖线虫病会有逐年增加的趋势。

目前临床上确诊异尖线虫病的主要方法仍是通过纤维内窥镜检查在胃内是否存在虫体。在临床上对呕吐、恶心、上腹部疼痛等不典型的异尖线虫病症状的确诊存在困难。故提高现有的检测水平，研制合适的检测异尖线虫病的方法十分必要。

对异尖线虫病诊断方法有病原学方法、分子生物学方法和免疫学方法。形态学上只能鉴定幼虫分型，即异尖线虫Ⅰ型幼虫和异尖线虫Ⅱ型幼虫.且若虫体有损坏或者缺少关键鉴定特征，则形态学上就很难区分虫种。分子生物学方面即利用等位酶分析、线粒体DNAcox2基因、核糖体RNA基因序列、核糖体DNA基因序列、多重PCR分析来鉴定虫种,虽说其精确性较高,但其花费大、检查时间长、技术专业性等因素限制了其广泛使用，且不适合在需要快速准确鉴定虫种的现场调查中使用。

免疫学方法在异尖线虫病诊断上的应用越来越受到重视，最有效的免疫学诊断方法是应用纯化天然抗原或重组抗原检测异尖线虫病人特异性IgE抗体，常用的方法主要有酶联免疫吸附法(ELISA)、免疫印迹法（Western blot）。但这些方法费时费力、或对仪器设备及操作人员要求较高、或不适合于快速检测、或交叉反应严重。

发明内容

本发明的目的提供一种检测异尖线虫病的免疫层析试纸条及其制备方法，所述的这种检测异尖线虫病的免疫层析试纸条及其制备方法要解决现有技术中检测异尖线虫病的方法费时、费力，可靠性低的技术问题。

本发明提供了一种用免疫学方法检测异尖线虫病的试剂，包括：（1）异尖线虫病的天然抗原，（2）抗人或抗哺乳动物IgG的探针；

其中，异尖线虫病天然抗原按如下方法制备：将活的异尖线虫Ⅲ期幼虫，用生理盐水洗净后，用滤纸吸取虫体水分，倒入玻璃匀浆器中加入缓冲液后手动搅碎，反复冻融，冰浴超声粉碎后，0-6℃离心，取上清即为异尖线虫病天然抗原。

其中，抗人或抗哺乳动物IgG探针是利用人或哺乳动物IgG免疫鼠、兔、羊或者其他动物获得多抗或单克隆抗体。

进一步的，所述的抗人或抗哺乳动物IgG探针还可以是金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA）、或者链球菌G蛋白（SPG）、或者是标记的金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA）、或者标记的链球菌G蛋白（SPG）。

具体的，所述的标记为胶体金、染料或者乳胶。

本发明还提供了一种检测异尖线虫病的免疫层析试纸条，包括一个样品垫和一个纤维素膜，所述的样品垫和所述的纤维素膜之间设置有一个含有胶体金标记探针的金标垫，所述的金标垫、所述的样品垫分别和一个纤维素膜紧密连接，在所述的纤维素膜的远离金标垫的一端设置有一个吸水垫，所述的吸水垫和所述的纤维素膜紧密连接，所述纤维素膜上远离金标垫的一端设置质控线，在质控线和金标垫之间的纤维素膜上设置一条检测线，所述的检测线有异尖线虫病的天然抗原组成，所述的质控线由特异性结合胶体金标记探针的抗体组成。

进一步的，所述的胶体金标记探针为利用人或哺乳动物IgG免疫鼠、兔、羊或者其他动物获得的多抗或单克隆抗体。

进一步的，所述标记探针为金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA），或者链球菌G蛋白（SPG）；

进一步的，所述的质控线中的抗体为鸡抗SPG的IgY抗体。