[发明专利]一种bar/PAT蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用

说明书

技术领域

　  本发明属生物技术领域，是一种单克隆抗体的制备和应用，涉及抗除草剂标记的转基因植物的检测技术。

背景技术

    bar/pat基因，为抗除草剂基因，编码蛋白—膦丝菌素乙酰转移酶（PAT）。该基因广泛应用于基因工程育种中，也是遗传转化中的标记基因，它使植物抵抗以L-phosphiothricin(PPT)为活性成分的除草剂。2001年全球种植的转基因作物面积达5260万hm²,抗除草剂作物占全球转基因作物的85%。从发展趋势上看，转基因的作物比例仍在不断增加。由于抗除草剂标记在商业化转基因植物应用广泛，随着转基因食品的快速发展，国外转bar或pat基因的作物和食品的大量进入我国，转bar基因的食品检测技术是转基因食品安全性评价的重要技术平台，其研究具有重要的意义。

开展转基因外源蛋白的检测，主要的方法有即Western杂交、酶联免疫吸附法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA)等，这些方法都依赖特异性高、纯度高、效价高的蛋白抗体。本发明针对bar/pat基因表达蛋白检测设计的抗PAT蛋白单克隆抗体，该单抗具有高特异性、与其他转基因材料或表达蛋白无交叉反应，效价高，达到10⁷以上。而单抗本身具有成本低，比多抗更敏感、精确、稳定，便于人为处理和质量控制，并可大量生产等优点，该单抗可用于快速检测植物、食品等农产品的转基因成分，及对公共卫生应急事件的检测，为抗除草剂转基因产品的检测提供技术支撑。 

发明内容

本发明的目的是提供一种bar/pat蛋白单克隆抗体及分泌改单克隆抗体的杂交瘤细胞株。 

本发明保护一种分泌bar/pat蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为4C2，已于2012年7月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号），保藏号为CGMCC No.6341 

本发明还保护所述杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体。

所述单克隆抗体在辅助鉴定转bar基因植物及其产品中的应用也属于本发明的保护范围。 

所述单克隆抗体在辅助转基因植株培育中（玉米、大豆、水稻、棉花等）的筛选鉴定的应用也属于本发明的保护范围。所述植物体可为转基因初世代材料。 

本发明还保护所述单克隆抗体在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒功能为如下：（a）辅助鉴定抗除草剂转基因植物； 

（b）辅助鉴定待测转基因植株是否为抗甘膦草除草剂植株；

（c）辅助鉴定食品、饲料或其他加工产品原料中是否含有转bar/pat基因的转基因植物成分。

本发明还保护含有所述单克隆抗体的试剂盒；所述试剂盒功能如下 

（a）辅助鉴定抗除草剂转基因植物；

（b）辅助鉴定待测转基因植株是否为抗甘膦草除草剂植株；

（c）辅助鉴定食品、饲料或其他加工产品原料中是否含有转bar/pat基因的转基因植物成分。

所述植物具体可为水稻、大豆、玉米、烟草、苜蓿、棉花等。 

所述待测外源蛋白为bar或pat基因的表达蛋白。 

本发明提供的单克隆抗体用于植物中外源PAT蛋白检测，具有特异性好，效价高、广谱性等优点。本发明研制的抗PAT蛋白单克隆抗体，可用于研制转基因bar/pat的免疫学诊断试剂，如酶联免疫诊断试剂，胶体金免疫试纸条，抗体芯片等。 

本发明的积极效果在于：可用于快速检测植物、食品等农产品的转基因成分，及对公共卫生应急事件的检测，为抗除草剂转基因产品的检测提供技术支撑。 

本发明通过小鼠腹腔注射单抗细胞株，即可获得大量的单克隆抗体，可直接用于转基因植株的抗除草剂标记筛选，对今后转基因植物研发过程的阳性筛选和转基因食品安全评价具有很大的开发潜力。 

附图说明

图1 SDS电泳分析PAT蛋白表达  M为蛋白质分子量标准  1为 300nm洗脱峰 2为200nm洗脱峰 3为100nm洗脱峰 4为10nm洗脱峰，5为穿透峰。 

图2 纯化单抗的SDS-PAGE电泳图  1,2 为该细胞株表达的抗体蛋白，3为阴性细胞株；M为蛋白质分子量标准。