[发明专利]一种从银杏叶中制备多种活性物质的方法

权利要求书

1.一种从银杏叶中制备多种活性物质的方法，包括：

(1)原料前处理步骤：银杏叶干品原料粉碎后，加入含有纤维素酶及果胶酶的水溶液进行破壁反应，烘干得到提取原料；

(2)提取步骤：在步骤(1)得到的提取原料，50～80％乙醇提取，60～90℃下提取，料液比1∶8～1∶20，提取2～4次，合并后得到提取液；

(3)多糖沉淀步骤：沉淀分离步骤；将步骤(3)中得到的提取液浓缩后，加入絮凝剂进行沉淀反应，过滤得到沉淀物银杏多糖；过滤得到的上清液为沉淀分离液；

(4)大孔树脂分离步骤：将步骤(3)中得到的沉淀分离液，经过极性或强极性大孔树脂分离，得到银杏提取物；

(5)硅胶干柱分离步骤：将步骤(4)中得到的银杏提取物湿法上样于硅胶干柱上，银杏提取物与硅胶的质量比为1/50～1/100，在常压下利用压力差以展开剂下行展开，分别获得银杏总黄酮与银杏总内酯；展开剂为甲醇与正己烷的混合液；

(6)反相层析精制步骤：对步骤(5)中得到的银杏总内酯，以C18填料为固定相，以甲醇与水的混合液为流动相，进行中低压反相层析，分别收集富含银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C的正组分；

(7)结晶步骤：分别将反相层析的三个正组分减压蒸馏至干得到固形物，各加入浓度为60％～80％的甲醇水溶液，40℃～60℃下充分溶解后，趁热过滤后，冷冻结晶，分别获得纯度大于98％的银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C。

2.如权利要求1所述的一种从银杏叶中制备多种活性物质的方法，其特征在于：所述原料前处理步骤中，所述纤维素酶及果胶酶的水溶液为：水溶液的体积与原料的质量比为0.5～2∶1(体积质量比)，纤维素酶的量与原料的质量比为0.5～3∶1000(质量比)，果胶酶的质量与原料的质量比为0.5～2∶1000(质量比)；所述破壁反应为：反应温度30～60℃，反应时间1～3小时。

3.如权利要求1所述的一种从银杏叶中制备多种活性物质的方法，其特征在于：所述多糖沉淀步骤中，所述提取液浓缩为：将提取液浓缩至与银杏叶干品原料的体积质量比为2～5∶1(L/kg)；所述絮凝剂剂为：壳聚糖、聚苯烯酰胺、聚苯烯酸钠、聚苯烯酸钙中的一种；所述加入絮凝剂进行沉淀反应，过滤得到沉淀物银杏多糖，其过程为：在浓缩液中加入絮凝剂，所加入絮凝剂与浓缩液的质量体积比为0.05～2∶100(kg/L)，搅拌10～30min后，常温静置6～12小时，过滤得到沉淀物干燥后得到银杏多糖。

4.如权利要求1所述的一种从银杏叶中制备多种活性物质的方法，其特征在于：所述大孔树脂分离步骤中，所述极性或强极性大孔树脂为：ADS-2、ADS-7、HPD-826、HPD-600中的一种；所述经过极性或强极性大孔树脂分离，其过程为：将沉淀分离液上样到大孔树脂上，用纯水或5％～15％的乙醇水溶液洗脱2～4柱体积，弃去洗脱液，再用40％～60％的乙醇水溶液洗脱2～4柱体积，收集洗脱液，干燥得到银杏提取物。

5.如权利要求1所述的一种从银杏叶中制备多种活性物质的方法，其特征在于：所述硅胶干柱分离步骤中，所述硅胶干柱为：填装有硅胶基填料、高径比5∶1～20∶1的装置，硅胶基填料由硅胶和硅藻土组成，硅藻土与硅胶的质量百分比为10％～20％；硅胶粒径为30μm～80μm，硅胶活性为II～III级；所述硅胶干柱的填装过程为：将硅胶基填料与等体积的有机溶剂混合成为悬浊液，倒入塞有玻璃棉和两通活塞的空心PVC柱，硅胶基填料不断沉积，溶剂经过玻璃棉流出，控制溶剂的流出速度，使硅胶基填料表面始终被溶剂覆盖，直到填装到所需要高度；所述有机溶剂为正己烷、石油醚、正戊烷中的一种。

6.如权利要求1所述的一种从银杏叶中制备多种活性物质的方法，其特征在于：所述硅胶干柱分离步骤中，所述展开剂的体积比为：甲醇∶正己烷＝90∶10～98∶2；所述下行展开的过程为：将展开剂从硅胶干柱顶加入，在常压下利用压力差下行展开，当展开剂流至硅胶干柱底部时，停止加入展开剂；分别将富含银杏黄酮和银杏内酯的硅胶干柱段切割刮出，用三氯甲烷振荡洗脱10～20分钟，重复洗脱2～3次，将所获的三氯甲烷溶液减压蒸干，分别得到的固形物即为银杏总黄酮和银杏总内酯；所述富含银杏黄酮和银杏内酯的硅胶干柱段是参照相同展开剂条件下硅胶薄层实验得到的两者的比移值Rf确定。