[发明专利]具有杀线虫活性的芽孢杆菌属细菌及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种具有杀线虫活性的芽孢杆菌属细菌，菌株为芽孢杆菌Bacillus sp. B-RS-06；该菌株的保藏编号为CGMCC No. 5352。

2.一种如权利要求1所述的具有杀线虫活性的芽孢杆菌属细菌的制备方法，其特征在于该方法用无菌磷酸缓冲液浸泡并振荡瑞香狼毒根系，获得瑞香狼毒根际土壤悬浮母液，对悬浮液进行系列梯度稀释，得到不同浓度的稀释液，分别取一定体积的不同浓度稀释液，均匀涂抹在细分离培养基即nutrient agar，NA平板上，将平板在特定的培养条件下培养，待长出肉眼可见的细菌菌落后，挑取适合计数的浓度平板，进行计数，并将所有的菌落在新鲜的NA培养基上纯化，得到纯的细菌菌株后，在低温短期或长期保存。

3.如权利要求2所述的具有杀线虫活性的芽孢杆菌属细菌的制备方法，其特征在于无菌磷酸缓冲液由NaCl 8 g、KCl 0.2 g、Na₂HPO₄ 1.15 g、 KH₂PO₄ 0.2 g以及无菌水1000 ml组成， pH 7.3。

4.如权利要求2所述的具有杀线虫活性的芽孢杆菌属细菌的制备方法，其特征在于将瑞香狼毒根系浸入无菌磷酸缓冲液中，充分振荡瑞香狼毒新鲜根系，将附着在根系表面的土壤洗进缓冲液，得到1/10的瑞香狼毒根际土壤悬浮母液。

5.如权利要求2所述的具有杀线虫活性的芽孢杆菌属细菌的制备方法，其特征在于瑞香狼毒根际土壤悬浮液的梯度稀释方法，以10倍体积为单位，用无菌水进行系列稀释，得到浓度梯度为10^-1、10^-2直至10^-8的系列稀释液。

6.如权利要求2所述的具有杀线虫活性的芽孢杆菌属细菌的制备方法，其特征在于取一定体积的系列稀释液的方法，就是从浓度梯度为10^-4-10^-8的系列稀释倍数中，分别取0.1 ml均匀涂布在NA平板培养基上。

7.如权利要求2所述的具有杀线虫活性的芽孢杆菌属细菌的制备方法，其特征在于NA细菌分离培养基由牛肉膏3 g, 蛋白胨5 g, NaCl 8 g, 琼脂粉12 g，蒸馏水1000 ml组成，pH 7.2-7.4。

8.如权利要求2所述的具有杀线虫活性的芽孢杆菌属细菌的制备方法，其特征在于特定培养条件为在NA平板培养基上，28±2℃避光培养。

9.如权利要求2所述的具有杀线虫活性的芽孢杆菌属细菌的制备方法，其特征在于肉眼可见的细菌菌落即colony-forming units，CFU为平均直径在大于等于1 mm以上的菌落。

10.如权利要求2所述的具有杀线虫活性的芽孢杆菌属细菌的制备方法，其特征在于选择适合计数的浓度平板方法，在直径为90 mm的培养皿中，肉眼可见的单个分散的菌落数在100-150 CFU。

11.如权利要求2所述的具有杀线虫活性的芽孢杆菌属细菌的制备方法，其特征在于短期保存可采用NA斜面培养基划线在4℃下保存，如果做长期保存，可在NA液体培养基和甘油的混合液中在-70℃下保存，NA液体培养基和甘油的体积比为1:1。

12.一种用菌株为芽孢杆菌Bacillus sp. B-RS-06作为杀虫剂，其特征在于B-RS-06的代谢物对植物寄生线虫的具有触杀活性；用于对松材线虫、马铃薯腐烂茎线虫等植物寄生线虫的生物防治。