[发明专利]细毡毛忍冬中有效成分的分离纯化方法

权利要求书

1.5-羟基-7,3′,4′-三甲氧基黄酮的分离纯化方法，其特征在于：它包括如下步骤：

（1）取细毡毛忍冬Lonicera similes Hemsl的干燥花蕾，加入70-90%V/V乙醇提取，合并提取液，回收溶剂，即得细毡毛忍冬总提取物浸膏；

（2）取细毡毛忍冬总提取物浸膏，加水配制上柱液，上大孔吸附树脂柱，依次用水、80%/V乙醇、90-95%V/V乙醇洗脱，收集90-95%v/v乙醇部位；

（3）取所得乙醇部位，回收溶剂后，上硅胶柱层析，依次用环己烷-乙酸乙酯=20∶1~0∶1，乙酸乙酯-甲醇=5∶1~0∶1系统进行梯度洗脱，每0.16个柱体积的洗脱液为1流份，收集洗脱液，薄层监测，取39~59份，回收溶剂后，用甲醇复溶，再上凝胶柱，用甲醇洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，重结晶，即得5-羟基-7,3′,4′-三甲氧基黄酮。

2.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于：步骤（1）中，所述乙醇提取的具体操作为：依次用浓度为90%V/V、80%V/V、70%V/V的乙醇提取；优选地，乙醇提取的具体方法为：分别用90%V/V、80%V/V、70%V/V的乙醇回流提取，每个浓度的乙醇提取1-2次，每次1-3小时，物料比为1∶6-10。

3.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于：步骤（2）中，依次用水、80%/V乙醇、95%V/V乙醇洗脱，收集95%v/v乙醇部位；所述大孔吸附树脂为D101型大孔吸附树脂。

4.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于：步骤（2）中，

上柱液浓度以生药计为0.02-0.2g/ml，比上柱量小于2.8g药材/g干树脂。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，上柱液浓度以生药计为0.10g/ml，比上柱量2.74g药材/g干树脂。

6.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于：步骤（3）中，梯度洗脱条件如下：

环己烷-乙酸乙酯=20∶1，1.07倍柱体积；环己烷-乙酸乙酯=10∶11.07倍柱体积，环己烷-乙酸乙酯=8∶1，3.3倍柱体积；环己烷-乙酸乙酯=6∶1；1.05倍柱体积；环己烷-乙酸乙酯=5∶1，2.05倍柱体积；环己烷-乙酸乙酯=4:1，2.0倍柱体积。

7.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于：步骤（3）中，所述凝胶柱为SephadexLH-20型凝胶柱；重结晶溶剂为甲醇。

8.β-谷甾醇的分离纯化方法，其特征在于：它包括如下步骤：

（1）取细毡毛忍冬Lonicera similes Hemsl的干燥花蕾，加入70-90%V/V乙醇提取，合并提取液，回收溶剂，即得细毡毛忍冬总提取物浸膏；

（2）取细毡毛忍冬总提取物浸膏，加水配制上柱液，上大孔吸附树脂柱，依次用水、80%/V乙醇、90-95%V/V乙醇洗脱，收集90-95%乙醇部位；

（3）取所得乙醇部位，回收溶剂后，上硅胶柱层析，用环己烷-乙酸乙酯=20∶1~0∶1，乙酸乙酯-甲醇=5∶1~0∶1系统进行梯度洗脱，每0.16个柱体积的洗脱液为1流份，收集洗脱液，薄层监测，取17~22份，回收溶剂后，重结晶，即得β-谷甾醇；

步骤（3）中，梯度洗脱条件如下：

环己烷-乙酸乙酯=20∶1，1.07倍柱体积；环己烷-乙酸乙酯=10∶1 1.07倍柱体积，环己烷-乙酸乙酯=8∶1，3.3倍柱体积。