[发明专利]细毡毛忍冬中有效成分的分离纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种细毡毛忍冬中有效成分的分离纯化方法，主要涉及5-羟基-7,3′,4′-三甲氧基黄酮、β-谷甾醇、β-胡萝卜苷的分离纯化方法。

背景技术

细毡毛忍冬Lonicera similes Hemsl为川产金银花的主流品种，分布广，资源蕴藏量大，据调查，成都荷花池中药材专业市场经销的金银花，四川省内中药店及医疗单位使用的金银花多为南江产金银花（细毡毛忍冬），并销往全国各地。目前四川南江县已建成了22个金银花专业示范村，全县金银花种植总面积达到26万亩，细毡毛忍冬占了95％以上，现有10.2万亩投产，年产干银花765万公斤，实现总产值2亿元，产区人均增收560元。金银花产业已成为南江县的主要经济支柱产业。

近年来，不少研究表明细毡毛忍冬绿原酸含量高，药理作用与药典收载品种相当。但目前川银花优势品种细毡毛忍冬仍未入选中国药典，尤其是《中国药典》2010年版，加强了对中药材专属性成分的鉴别及含量测定，而细毡毛忍冬尚缺乏相关的基础研究。

5-羟基-7,3′,4′-三甲氧基黄酮对金葡球菌等具有抗菌作用（邢俊波,等，忍冬花蕾化学成分研究[J].中国新药杂志,2002,11(11):856-859）。β-谷甾醇，有降低血清胆固醇的作用，可用于Ⅱ型高脂血症及预防动脉粥样硬化；同时，该化合物还可以转化成药用维生素D3原料以及多种激素。β-胡萝卜苷，是神经鞘的主要成分之一，同时还具有抗氧化的药理活性。

目前，还未见从细毡毛忍冬中分离纯化5-羟基-7,3′,4′-三甲氧基黄酮等化合物的相关报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种5-羟基-7,3′,4′-三甲氧基黄酮的分离纯化方法；本发明的另一目的在于提供β-谷甾醇、β-胡萝卜苷的分离纯化方法。

本发明提供了5-羟基-7,3′,4′-三甲氧基黄酮的分离纯化方法，它包括如下步骤：

（1）取细毡毛忍冬Lonicera similes Hemsl的干燥花蕾，加入70-90%V/V乙醇提取，合并提取液，回收溶剂，即得细毡毛忍冬总提取物浸膏；

（2）取细毡毛忍冬总提取物浸膏，加水配制上柱液，上大孔吸附树脂柱，依次用水、80%/V乙醇、90-95%V/V乙醇洗脱，收集90-95%v/v乙醇部位；

（3）取所得乙醇部位，回收溶剂后，上硅胶柱层析，依次用环己烷-乙酸乙酯=20∶1~0∶1，乙酸乙酯-甲醇=5∶1~0∶1系统进行梯度洗脱，每0.16个柱体积的洗脱液为1流份，收集洗脱液，薄层监测，取39~59份，回收溶剂后，用甲醇复溶，再上凝胶柱，用甲醇洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，重结晶，即得5-羟基-7,3′,4′-三甲氧基黄酮。

其中，步骤（1）中，所述乙醇提取的具体操作为：依次用浓度为90%V/V、80%V/V、70%V/V的乙醇提取；优选地，乙醇提取的具体方法为：分别用90%V/V、80%V/V、70%V/V的乙醇回流提取，每个浓度的乙醇提取1-2次，每次1-3小时，物料比为1∶6-10。

其中，步骤（2）中，依次用水、80%/V乙醇、95%V/V乙醇洗脱，收集95%v/v乙醇部位；所述大孔吸附树脂为D101型大孔吸附树脂。

其中，步骤（2）中，上柱液浓度以生药计为0.02-0.2g/ml，比上柱量小于2.8g药材/g干树脂。

进一步地，步骤（2）中，上柱液浓度以生药计为0.10g/ml，比上柱量2.74g药材/g干树脂。

其中，步骤（3）中，梯度洗脱条件如下：

环己烷-乙酸乙酯=20∶1，1.07倍柱体积；环己烷-乙酸乙酯=10∶11.07倍柱体积，环己烷-乙酸乙酯=8∶1，3.3倍柱体积；环己烷-乙酸乙酯=6∶1；1.05倍柱体积；环己烷-乙酸乙酯=5∶1，2.05倍柱体积；环己烷-乙酸乙酯=4:1，2.0倍柱体积。

其中，步骤（3）中，所述凝胶柱为SephadexLH-20型凝胶柱；重结晶溶剂为甲醇。

本发明还提供了β-谷甾醇的分离纯化方法，它包括如下步骤：

（1）取细毡毛忍冬Lonicera similes Hemsl的干燥花蕾，加入70-90%V/V乙醇提取，合并提取液，回收溶剂，即得细毡毛忍冬总提取物浸膏；

（2）取细毡毛忍冬总提取物浸膏，加水配制上柱液，上大孔吸附树脂柱，依次用水、80%/V乙醇、90-95%V/V乙醇洗脱，收集90-95%乙醇部位；