[发明专利]检测细菌总数的试剂盒和检测方法

权利要求书

1.细菌总数检测试剂盒，其包括：

终浓度0.1%～0.2%的TritonX-100水溶液，作为体细胞三磷酸腺苷（ATP）释放试剂；

终浓度5mmol/L～10mmol/L的十六烷基三甲基溴化铵（CTMAB）水溶液，作为细菌细胞裂解试剂；和

终浓度5mmol/L～10mmol/L的β-环糊精水溶液，作为细菌细胞裂解试剂的中和剂；和

包含荧光素酶和荧光素的发光试剂。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述荧光素酶的浓度为0.05～0.075g/L，荧光素的浓度为0.07～0.25g/L。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其中所述发光试剂还包含镁离子，作为稳定剂的EDTA，作为抗氧化剂的DDT，作为酶稳定剂的BSA，作为缓冲剂的Tris。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其中所述镁离子的浓度为10mmol/L，EDTA的浓度为1mmol/L，DDT的浓度为1mmol/L，BSA的浓度为100μg/L，Tris的浓度为25mmol/L，pH为7.8。

5.如前述任一项权利要求所述的试剂盒，其包括：

终浓度0.1%或0.2%的TritonX-100水溶液，作为体细胞ATP释放试剂；

终浓度5mmol/L或10mmol/L的CTMAB水溶液，作为细菌细胞裂解试剂；

终浓度5mmol/L或10mmol/L的β-环糊精水溶液，作为细菌细胞裂解试剂的中和剂；和

发光试剂，包含0.075g/L荧光素酶、0.25g/L荧光素、1mmol/L EDTA、10mmol/L MgSO₄、1mmol/L DDT，100μg/L BSA和25mmol/L Tris，pH为7.8。

6.利用前述任一项权利要求所述的试剂盒检测细菌总数的方法，其中，所述方法包括：

将待检测样本和细菌标准品放入不同的过滤比色杯中，加入所述体细胞ATP释放试剂作用50秒～80秒，抽滤除去液体，然后加入所述细菌细胞裂解试剂作用10秒～20秒，随后依次加入所述中和剂和发光试剂，并利用分光光度计检测荧光信号。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述过滤比色杯的滤膜为0.22μm。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其中所述方法包括利用细菌标准品的荧光信号计算待测样本中的细菌数的步骤。