[发明专利]急性B淋巴细胞白血病启动细胞表型分类试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种急性B淋巴细胞白血病启动细胞表型分类试剂盒，与七色流式细胞仪组成白血病启动细胞表型分类装备，其特征在于该试剂盒的结构中配置了下述单克隆抗体试剂：CD58、CD10、CD34、CD19、CD45和CD38。

2.根据权利要求1所述的急性B淋巴细胞白血病启动细胞表型分类试剂盒，其特征在于所述单克隆抗体试剂CD58、CD10、CD34、CD19、CD45和CD38依前后排列顺序依次进行特异性荧光素标记为：FITC、PE、PerCP、APC-Cy7、Pacific Blue和APC。

3.根据权利要求2所述的急性B淋巴细胞白血病启动细胞表型分类试剂盒，其特征在于所述试剂盒中还设置了溶红细胞液和pH为7.2~7.4的10×PBS缓冲液。

4.根据权利要求2所述的急性B淋巴细胞白血病启动细胞表型分类试剂盒，其特征在于所述10×PBS缓冲液的配制方法：称取Na₂HPO₄.12H₂O   26.3g、NaH₂PO₄.2H₂O3.0g和NaCl 85.0g于容量瓶中，加蒸馏水至1000mL：取配套容量的缓冲剂封装后装入试剂盒待用。

5.根据权利要求2所述的急性B淋巴细胞白血病启动细胞表型分类试剂盒，其特征在于所述试剂盒中还设置了配套计量的小牛血清试剂。

6.根据权利要求2所述的急性B淋巴细胞白血病启动细胞表型分类试剂盒，其特征在于所述试剂盒中还设置了与七色流式细胞仪配套使用的专用试管、使用该试管与借助七色流式细胞仪配合完成急性B淋巴细胞白血病启动细胞表型分类的步骤与注意事项的说明书。

7.借助于权利要求1所述的试剂盒和七色流式细胞仪对急性B淋巴细胞白血病启动细胞进行表型分类的方法，其特征在于该方法中包括下述步骤：

步骤一、试剂配制

1.1、配制pH为7.2~7.4的10×PBS缓冲液，并稀释10倍成为1×PBS缓冲液，

1.2、取溶红细胞液，并用1×PBS缓冲液稀释10倍，

1.3、取小牛血清加入至1×PBS缓冲液中，制备含0.5wt.%~2wt.%血清的PBS；

步骤二、对骨髓标本进行荧光标记，制备测试标本

2.1在同一专用试管中，依次分别加入荧光标记的单克隆抗体如下：3μL CD58FITC，10μL CD10PE，1μL CD34 PerCP， 2μLCD38APC，5μL CD19APC-Cy7和1.3μL CD45Pacific Blue；然后再加入100μL骨髓标本，混匀，室温避光放置15分钟孵育，

2.2、加入步骤1.2中稀释后的溶红细胞液2mL，混匀后避光，室温放置 8分钟，溶解红细胞，

2.3、1500转/分离心5分钟，弃上清液，加入步骤1.3中2mL含0.5wt.%~2wt.%血清的PBS，混匀，

2.4、1500转/分离心5分钟，弃上清液，加入步骤1.1中0.3mL1× PBS缓冲液，混匀，制成待测标本；

步骤三、按照七色流式细胞仪的操作要求对待测标本进行处理后检测，获得特异性荧光标记的骨髓细胞数据，借助仪器统计与分析软件确定骨髓样品中白血病启动细胞上CD58的表达比例，作为白血病启动细胞表型分类的主要依据。