[发明专利]多残留金标快速检测试剂盒及其检测方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于免疫学领域，涉及快速检测食品中氨基糖苷类抗生素庆大霉素残留的试剂盒和方法。

背景技术

自2008年以来，乳制品的安全问题在全国乃至全世界造成了巨大的影响，不仅广大消费者的权益受到了损害，整个乳制品行业包括众多的奶农的利益也受到了巨大损害。乳制品行业的食品安全问题已经严重关系到了我国的国计民生，急需解决。乳制品的安全，既需要从源头开始，通过各项规章制度对质量进行层层控制，也需要各种检测技术进行层层把关。由于乳制品生产涉及的原料数量巨大、来源众多，因此如何实现对大量原料奶样品准确快速的筛选，是目前检测技术急需突破的难点之一。

另一方面，因抗生素种类的增多以及细菌耐药性的增强，目前用于奶牛疾病预防和治疗中的药物种类也大大增多，使得原料奶中的药物残留除了常见的β-内酰胺类抗生素外，氟喹诺酮类抗生素、氨基糖苷类抗生素的残留比例也大大增加。这些药物残留对人体同样存在着安全隐患，如氟喹诺酮类药物在人体内的残留易引起人体神经系统不良反应，严重时还会诱发癫痫病，并伴有潜在的催畸作用，氨基糖苷类药物则均具有耳毒性和肾脏毒性，能损害脑神经、耳蜗神经，轻者听力下降，重者永久性耳聋，会对近端肾曲管有损害，造成血尿、肾功能衰退等，此外，这些药物的长期服用还易引起细菌耐药性。因此，在原奶收购环节，急需一种可以快速检测多种抗生素残留的方法以帮助检验机构和企业节约时间、降低成本、提高效率。

目前，针对氟喹诺酮和氨基糖苷类抗生素的检测方法多是酶联免疫吸附反应（ELISA）、高效液相色谱（HPLC）或液质联用（LC-MS/MS）等方法。这些方法作为一种实验室常规方法具有准确、灵敏度高、重复性好等特点，然而，由于存在对设备、环境、操作技能等要求，检测周期较长、价格昂贵，因而其检测主要集中在大型科研检测机构或大型企业实验室里，不适合中小企业和众多奶站的大规模样本筛选使用。在快速检测方面，现有的快速检测方法主要集中β-内酰胺类抗生素检测上，比如UNISENSOR、β-STAR、ROSA、SNAP等，而针对氟喹诺酮和氨基糖苷类抗生素的快速检测产品则几乎没有，并且这些方法均是仅针对一种抗生素进行检测，由于牛奶抗生素检测指标较多，单个检测指标的方法则意味着一个原奶样本就需要使用多个检测产品进行多次检测，既耗费了时间，也浪费了人力、财力。因此急需开发多指标快速检测方法以满足日益增加的检测需求。

发明内容

本发明解决的技术问题是提供一种能够同时检测食品中多种抗生素残留检测试剂盒及其检测方法和应用；发明主要目的在于克服传统的检测方法繁琐，检测耗时长，在实际工作中应用局限性大等缺陷，同时改变了单一项目检测和多种检测项目简单的合并检测的局面，从而提供一种更加快速、简捷、性价比高、安全的检测试剂盒及其检测方法。

食品中多残留金标快速检测试剂盒，所述试剂盒包括检测条和塑料卡壳，所述检测条是由样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫组成。所述金标抗体结合垫是由胶体金标记的庆大霉素单克隆抗体、胶体金标记的卡那霉素单克隆抗体和胶体金标记的氟喹诺酮类单克隆抗体组成；所述硝酸纤维素膜中部包被有检测线和控制线，检测线设置有能与金标抗体结合垫上三种单克隆抗体进行特异性结合的蛋白偶联物，蛋白偶联物分别为环丙沙星-BSA偶联物、庆大霉素-BSA偶联物、卡那霉素-BSA偶联物，控制线设置有羊抗鼠IgG单克隆抗体。

所述金标抗体结合垫上的胶体金标记庆大霉素单克隆抗体由庆大霉素单克隆抗体与25nm的胶体金颗粒结合在一起；

胶体金标记卡那霉素单克隆抗体由卡那霉素单克隆抗体与25nm的胶体金颗粒结合在一起；

胶体金标记氟喹诺酮类单克隆抗体由氟喹诺酮类单克隆抗体与60nm的胶体金颗粒结合在一起。

所述硝酸纤维素膜上检测线的环丙沙星-BSA偶联物、庆大霉素-BSA偶联物、卡那霉素-BSA偶联物的包被浓度分别为0.08、0.13和0.15mg/mL，包被量均为1μL/cm；

控制线上包被羊抗鼠IgG单克隆抗体，浓度为1mg/mL，包被量为1μL/cm。

一种多残留金标快速检测试剂盒的制备方法阐述如下：

1）金标抗体结合垫的制备

a.空白胶体金的制备：

采用柠檬酸盐还原法制备胶体金颗粒，通过调节氯金酸和柠檬酸三钠加入量制备胶体金颗粒大小为25nm和60nm的胶体金溶液。炼制过程中溶液的颜色会发生变化，当溶液的颜色不再发生变化时保持沸腾状态10min后将烧瓶置于室温，充分冷却后，取出反应用的转子，胶体金溶液4℃冷藏保存，保质期为1个月；