[发明专利]用于检测外周血中循环肿瘤细胞ROR1蛋白的试剂及其应用

权利要求书

1.一种用于检测外周血中循环肿瘤细胞ROR1蛋白的试剂，其特征在于，包括：ROR1抗体、缓冲液、标记物、核染料及淋巴细胞识别抗体。

2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述核染料为DAPI；淋巴细胞识别抗体为CD45。

3.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述ROR1抗体为单克隆抗体、多克隆抗体或免疫血清。

4.一种用于检测循环肿瘤细胞ROR1蛋白的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1至3中任一项所述的试剂。

5.一种如权利要求1至3中任一项所述的试剂在制备诊断癌症的试剂盒中的应用。

6.一种如权利要求1至3中任一项所述的试剂在体外检测循环肿瘤细胞ROR1蛋白的应用。

7.一种帮助癌症诊断的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）从外周血或生物体液中分离非红细胞非白细胞的混合细胞群；

2）检测所述细胞是否表达ROR1基因和/或蛋白；以及

3）根据所述ROR1基因和/或蛋白表达信息帮助癌症诊断。

8.一种用于帮助治疗方案的制定、评估癌症治疗效果和存活率的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）从来自经治疗之后的癌症患者的全血或生物体液中分离肿瘤细胞；

2）监测所述肿瘤细胞中ROR1基因和/或蛋白表达水平；以及

3）根据所述ROR1基因和/或蛋白表达水平帮助治疗方案的制定，判断所述癌症治疗效果和存活率，

其中所述治疗选自手术、放射治疗、药物治疗、靶向治疗、或它们的联合疗法。

9.一种用于帮助评估癌细胞转移、耐药性和复发可能性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）从来自经治疗之后的癌症患者的全血或生物体液中分离循环肿瘤细胞；

2）监测所述循环肿瘤细胞中ROR1基因和/或蛋白表达水平；以及

3）根据所述ROR1基因和/或蛋白表达水平帮助评估癌细胞转移、耐药性和复发可能性，

其中所述治疗选自手术、放射治疗、药物治疗、靶向治疗、或它们的联合疗法。

10.根据权利要求7至9任一项所述的帮助癌症诊断检测方法、帮助评估癌症治疗效果和存活率的方法或帮助评估癌细胞转移、耐药性和复发可能性的方法，其特征在于，所述从生物体液中分离肿瘤细胞采用选自抗体直接捕获法、循环肿瘤细胞富集分离方法、过滤法中的一种；优选地，所述生物体液包括循环血液、骨髓、胸水、脑脊液、淋巴液、腹水、尿液、唾液、痰液、冲灌液、精液、腺体分泌物、炎性渗出物；优选地，ROR1蛋白检测方法包括：免疫荧光法如荧光显微镜、流式细胞技术、微流体、免疫沉淀、西点墨点法、酶联免疫吸附测定、放射免疫分析法、和质谱方法；优选地，通过聚合酶链式反应和/或逆转录聚合酶链式反应检测所述ROR1基因的表达水平；优选地，所述循环血液取自正常人或癌症病人，所述癌症病人包括患有上皮来源的实体瘤的病人；优选地，所述癌症病人包括患肺癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、膀胱癌、睾丸癌、食管癌、结直肠癌、食管癌、胃癌、肝癌、脑癌、神经胶质瘤、胰腺癌、和/或皮肤癌的病人；优选地，通过ROR1抗体检测ROR1的蛋白表达水平，采用荧光标记进行标记，所述荧光标记采用免疫组织化学染色、免疫荧光抗体染色及其后续的借助荧光显微镜和/或荧光分析技术进行的定性与定量分析。

11.一种用于抗肿瘤药物或抑制癌细胞转移的药物筛选的方法，包括：

1）从来自患癌实验动物的生物体液中分离循环肿瘤细胞；

2）监测所述循环肿瘤细胞中ROR1基因或蛋白表达水平；以及

3）根据预定频率和用量及给药时间给予所述患癌的实验动物候选化合物，

4）再次从来自给予所述候选化合物的所述患癌实验动物的生物体液中分离循环肿瘤细胞；

5）再次监测来自所述给予候选化合物的所述实验动物的所述循环肿瘤细胞中ROR1基因或蛋白表达水平，其中所述循环肿瘤细胞中ROR1基因或蛋白表达水平低于在步骤2）中所监测的所述循环肿瘤细胞中ROR1基因或蛋白表达水平的候选化合物即为目标化合物。