[发明专利]用于检测外周血中循环肿瘤细胞ROR1蛋白的试剂及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及蛋白质检测技术领域，具体而言，涉及一种用于检测外周血中循环肿瘤细胞ROR1蛋白的试剂及其应用。

背景技术

在肿瘤的生长过程中，肿瘤细胞会从原发病灶脱落进入到循环系统中成为“循环肿瘤细胞”，并且作为一种检测肿瘤特异的检验指标。肿瘤转移是循环肿瘤细胞从原发肿瘤病灶进入到血液循环之后会依附到远端的组织开始生长发育成新的肿瘤。大量临床数据表明，循环肿瘤细胞是造成肿瘤患者死亡的主要原因。最近开发出来的对于循环肿瘤细胞的分离方法对肿瘤的早期诊断有着非常重要的意义。重要的是循环肿瘤细胞的定量可以用来预测肿瘤转移的后果。另外，肿瘤干细胞（循环肿瘤细胞的一种，会导致肿瘤的产生）可以被用于肿瘤转移以及复发的诊断。因此，循环肿瘤细胞的检测已被公认为可有效地应用于体外早期癌症诊断，化疗药物的快速评估，个体化治疗包括临床筛药、耐药性的检测，肿瘤复发的监测以及肿瘤新药物的开发等。然而，如何找到敏感特异和稳定的循环肿瘤细胞标记物以准确识别循环肿瘤细胞是目前困扰开发循环肿瘤细胞检测技术的难题。

捕获循环肿瘤细胞的方法报道很多，基本分为三大类：抗体直接捕获，富集，过滤。相比之下，如何准确识别鉴定分离出的细胞为循环肿瘤细胞报道甚少，主要原因是缺乏稳定特异的肿瘤细胞识别物。现有的包括美国药监局批准的“细胞寻找系统（CellSearch System）”方法都采用细胞角蛋白（CK）和/或EpCAM阳性，CD45阴性的有核细胞作为识别循环肿瘤细胞的判断标准。但是越来越多的试验证明并非所有癌细胞都表达EpCAM。癌症发展进程中或在转移时，某些癌症的EpCAM表达增高而某些癌症的EpCAM降低。癌细胞特别在由上皮细胞源性到间质细胞性转换期间，CK和EpCAM表达都降低。EpCAM表达低的癌细胞容易从实体肿瘤脱落，而特殊结构功能的细胞角蛋白会促使癌细胞更具可塑性和迁移性。虽然人们试图用更多的肿瘤标记物抗体来增强鉴定循环肿瘤细胞的准确性和敏感性，由于这些肿瘤表达的蛋白或者只在部分人群中表达或者随肿瘤发展的不同阶段而改变，所以检测成本增加又解决不了根本问题。

ROR归属于膜表面氨酸激酶家族，有ROR1和ROR2成员，最先在脑胶质瘤细胞中发现。两者的基因分别在染色体1和9号上，编码104KD的蛋白。一直以来认为两个ROR受体都为“孤儿”受体，直到最近才发现Wnt5A是ROR2的内原性配体。然而ROR1的内原性配体至今还没找到。ROR在胚胎神经器官发育表达很高而在成熟后消失。近来发现ROR1在急性和慢性白血病细胞中表达并对癌细胞的生长起决定作用。然而如何监测ROR1以及在肿瘤诊断、治疗、转移中的应用进展甚少。

发明内容

本发明旨在提供一种用于检测循环血液中肿瘤细胞表达的ROR1蛋白的试剂及其应用，以解决现有缺乏简便，灵敏和可靠的癌症早期诊断和癌症转移监测的技术问题。

为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种用于检测外周血中循环肿瘤细胞ROR1蛋白的试剂。该试剂包括：ROR1抗体、缓冲液、标记物、核染料及淋巴细胞识别抗体。

进一步地，核染料为DAPI；淋巴细胞识别抗体为CD45。

进一步地，ROR1抗体为单克隆抗体、多克隆抗体或免疫血清。

根据本发明的另一个方面，提供了一种用于检测循环肿瘤细胞ROR1蛋白的试剂盒。该试剂盒包括如权利要求1或2的试剂。

根据本发明的再一个方面，提供一种上述试剂在制备诊断癌症的试剂盒中的应用。

根据本发明的再一个方面，提供一种上述试剂在体外检测循环肿瘤细胞ROR1蛋白的应用。

根据本发明的再一个方面，提供一种帮助癌症诊断的检测方法。该方法包括以下步骤：1）从外周血或生物体液中分离非红细胞非白细胞的混合细胞群；2）检测细胞是否表达ROR1基因和蛋白；以及3）根据ROR1基因和/或蛋白表达信息帮助癌症诊断。

根据本发明的再一个方面，提供一种用于帮助治疗方案的制定、评估癌症治疗效果和存活率的方法。该方法包括以下步骤：1）从来自经治疗之后的癌症患者的全血或生物体液中分离肿瘤细胞；2）监测肿瘤细胞中ROR1基因和/或蛋白表达水平；以及3）根据ROR1基因和/或蛋白表达水平帮助治疗方案的制定，判断癌症治疗效果和存活率，其中治疗选自手术、放射治疗、药物治疗、靶向治疗、或它们的联合疗法。