[发明专利]大豆细菌性斑点病菌harpinZPsgA1蛋白的表达和应用

权利要求书

1.一种编码具有harpin蛋白功能的氨基酸序列的核苷酸序列hrpZ_PsgA1，所述核苷酸序列含有SEQ ID NO：1所示核苷酸序列或与其互补的核苷酸序列。

2.一种载体，其特征在于，所述载体含有权利要求1所述的核苷酸序列，优选地，所述载体为pET41a(+)-hrpZ_PsgA1重组载体。

3.如权利要求2所述的载体的构建方法，其由以下方法构建：

（1）将大豆细菌性斑点病菌A1菌株在28℃条件下于KB固体培养基上培养，之后提取A1菌株基因组DNA，用5'端分别引入BamH1和EcoR1酶切位点的引物对hrpZ_PsgA1-P1和hrpZ_PsgA1-P2以A1菌株的基因组DNA为模板进行PCR扩增：

hrpZ_PsgA1-P 1：5'-GGGGATCCATGCAGAGTCTCAGTCTTAAC BamH1（SEQ ID NO：3），

hrpZ_PsgA1-P2：5'-GGGAATTCTCAGGCAGCAGCCTGGTTG EcoR1（SEQID NO：4）；

反应条件：94℃预变性4min，94℃变性1min，56℃退火1min，72℃延伸90s，循环35次，72℃延伸10min，将PCR产物与pMD18-T载体连接，获得重组质粒pMD18-T-hrpZ_PsgA1并将其转化到大肠杆菌DH5α中；

（2）以重组质粒pMD18-T-hrpZ_PsgA1为模板，PCR扩增，扩增产物回收后经BamH1和EcoR1双酶切后连接到表达载体pET41a(+)上，使得hrpZ_PsgA1基因与pET41a(+)上的还原型谷胱甘肽GST标签融合，进而得到重组质粒pET41a(+)-hrpZ_PsgA1。

4.一种含有权利要求2所述载体的重组细胞，优选地，所述重组细胞为重组大肠杆菌BL21/pET41a(+)-hrpZ_PsgA1。

5.如权利要求4中所述的重组细胞的构建方法，其包括将重组质粒ET41a(+)-hrpZ_PsgA1转化至大肠杆菌BL21中，获得重组大肠杆菌BL21/pET41a(+)-hrpZ_PsgA1。

6.如权利要求1所述的核苷酸序列所编码的蛋白harpinZ_PsgA1，其序列为SEQ ID NO：2。

7.包含如权利要求4所述的重组细胞或如权利要求6所述的蛋白的生物制品。

8.如权利要求7所述的生物制品在植物病害防治中的应用，优选地，所述植物病害为由烟草花叶病毒引起的植物病害。