[发明专利]胸腺肽β4分离与纯化工艺

权利要求书

1.胸腺肽β₄分离与纯化工艺，其特征在于：步骤1、胸腺组织→匀浆→离心→取上清液，加热→取上清液并冷却，粗品提取液中加入丙酮→真空抽滤去除丙酮→将沉淀溶解，加入硫酸铵→得到TF5沉淀；

步骤2、将提取的TF5溶于磷酸氢二钠-枸橼酸缓冲液，配成上样溶液，制得的上清液冷冻，放入冷冻干燥机中冷冻干燥；阳离子交换采用CM - sepharose FF凝胶，上样液通过阳离子交换柱，交换之后用NaCl溶液洗脱；收集Tβ₄所在的洗脱峰，冷冻后进行冷冻干燥；将冻干粉溶于的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液，通过DEAE-sepharose FF阴离子交换柱，离子交换之后分别以去离子水， NaCl溶液洗脱；将收集得到的Tβ₄洗脱液，装入透析袋，透析后溶液冷冻干燥，得到产品。

2.根据权利要求1所述的胸腺肽β₄分离与纯化工艺，其特征在于：步骤1、TF5粗提物的制备采用硫酸铵沉淀法：

胸腺组织→匀浆→10000r/min离心20min→取上清液，加热到80℃→取上清液并冷却到6℃，每100mL粗品提取液中加入-lO℃的75％丙酮5～10mL→真空抽滤去除丙酮→将沉淀溶解，加入硫酸铵至25％～50％饱和度→得到TF5沉淀；

步骤2、将提取的TF5以5g/L溶于0．02mol/L的pH值4．2的磷酸氢二钠-枸橼酸缓冲液，配成上样溶液，制得的上清液在-20℃冷冻，放入冷冻干燥机中冷冻干燥；阳离子交换采用CM - sepharose FF凝胶，上样液以5BV/h的速度通过阳离子交换柱，交换之后用1％，4％和5％的NaCl溶液以3．0BV/h洗脱；收集Tβ₄所在的洗脱峰，-20℃冷冻后进行冷冻干燥；将冻干粉溶于0．02mol/L的pH值6．8的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液，以2BV/h的速度通过DEAE-sepharose FF阴离子交换柱，离子交换之后分别以去离子水，1％，4％，5％的NaCl溶液以1．5BV/h洗脱；将收集得到的Tβ₄洗脱液，装入截留相对分子质量为2000的透析袋，4℃冰箱透析3次，每次24h；透析后溶液冷冻干燥，得到产品。