[发明专利]胸腺肽β4分离与纯化工艺

说明书

技术领域

本发明属于化学领域，更具体的说，本发明涉及胸腺肽β4分离与纯化工艺的改进。

背景技术

胸腺肽β₄是胸腺分泌的具有生物活性的多肽的混合物，其含有多种有效成分，可改善机体的免疫状态，协调内分泌，提高机体对细菌、病毒感染的抵抗力。

最初从小牛胸腺中分离得到的胸腺素，根据其在等电聚焦电泳分析图谱上的位置，可划分为α，β，γ三个区：α区pI<5，β区pI在5—7之间，γ区pI>7。如胸腺肽α可以增强机体细胞免疫功能，已经用于临床治疗。

最新研究发现，胸腺肽β不仅参与免疫过程，而且表现出多种生物学功能，引起了研究者的广泛关注。

β₄是胸腺肽β家族中的一员，Tβ₄由43个氨基酸组成，具亲水性，相对分子质量5000，pI=5．1，N端丝氨酸被乙酰化。胸腺肽Tβ₄具有多种生物学功能：Tβ₄在骨髓干细胞发育成前胸腺细胞阶段诱导末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)活性，从而调节T细胞的分化；Tβ₄能够调节肌动蛋白的动力学变化，通过调节肌动蛋白G与F之间的比例来影响细胞骨架结构的形成。

同时，研究发现Tβ₄具有消炎和促进创伤愈合的功效，能够促进创伤部位的血管生成、胶原沉积等修复过程，这使得Tβ₄具有很高的医用价值。更重要的是，最新的研究表明Tβ₄基因的表达水平与癌细胞转移旱止相关，与肿瘤凋亡关系密切。这为寻找治疗癌症的新方法提供了新的思路，因此具有广阔的新药开发前景。正是由于Tβ₄这一系列重要的生物应用前景，分离纯化得到Tβ₄产品用于进一步的科学研究就硅得尤为重要。

目前在我国，对于Tβ₄分离纯化工艺的研究相对较少。而国外已有Tβ₄分离的文献大多采用等电聚焦或高效液向分离。这些方法虽然得到的产品纯度高，但是一方面对设备要求高、分离成本高；另一方面得到的产品量太少，分离还不具备产业化规模。

发明内容

本发明就是针对上述问题，提供了一种采用低压离子交换色谱对其进行分离纯化研究，得到了纯度高的Tβ₄产品，符合工业化生产的要求的胸腺肽β₄分离与纯化工艺。

为实现本发明的上述目的，本发明采用如下技术方案，本发明的胸腺肽β₄分离与纯化工艺是。

步骤1、胸腺组织→匀浆→离心→取上清液，加热→取上清液并冷却，粗品提取液中加入丙酮→真空抽滤去除丙酮→将沉淀溶解，加入硫酸铵→得到TF5沉淀。

步骤2、将提取的TF5溶于磷酸氢二钠-枸橼酸缓冲液，配成上样溶液，制得的上清液冷冻，放入冷冻干燥机中冷冻干燥；阳离子交换采用CM - sepharose FF凝胶，上样液通过阳离子交换柱，交换之后用NaCl溶液洗脱；收集Tβ₄所在的洗脱峰，冷冻后进行冷冻干燥；将冻干粉溶于的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液，通过DEAE-sepharose FF阴离子交换柱，离子交换之后分别以去离子水， NaCl溶液洗脱；将收集得到的Tβ₄洗脱液，装入透析袋，透析后溶液冷冻干燥，得到产品。

本发明的有益效果。

本发明的麻竹种植方法周期短、见效快、投资少、效益高，好经营、便于管理，并且收益期长；通过本方法，可大幅度提高麻竹产量，和麻竹的质量，成活率也有了显著的提高；并且具有保持水土的社会效益。

具体实施方式

本发明的麻竹的栽培方法是。