[发明专利]昆虫、昆虫血淋巴及其组装活性物和应用

权利要求书

1.昆虫、昆虫血淋巴及其组装活性物在激活酚氧化酶原激活系统或/和Toll信号传递途径系统中的生物活性。

2.昆虫、昆虫血淋巴及其组装活性物在微生物及其相关分子模式检测中的应用。

3.昆虫血淋巴在制备酚氧化酶原激活系统组装活性物中的应用。

4.昆虫血淋巴在分离纯化抗菌肽中的应用。

5.根据权利要求1或2或3或4所述的应用，其特征在于，所述的昆虫血淋巴含有酚氧化酶原激活系统组分，酚氧化酶原激活系统组分包括针对革兰阳性菌或革兰阴性菌或真菌的模式识别蛋白一关联性模式识别蛋白、系列关联性丝氨酸蛋白酶(原)、相应的各种关联性调节剂、酚氧化酶原，酚氧化酶原激活系统通过识别微生物或相关分子模式，激活下游丝氨酸蛋白酶级联系统，最终导致酚氧化酶原被激活成酚氧化酶或/和激活Toll信号传递系统，从而诱导产生抗菌肽。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，制备酚氧化酶原激活系统组装活性物采用中性盐分级盐析方法、离子交换层析方法、疏水层析方法、凝胶过滤层析方法制备。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：

中性盐分级盐析方法的步骤如下：

将昆虫血淋巴收集液，按从昆虫血淋巴收集液分离纯化酚氧化酶原激活系统活性组分技术的特征要求，用酸性溶液或碱性溶液调pH至要求条件范围内并置于特征要求的温度，优选0℃-10℃；在样品溶液中加入中性盐至饱和度20％，中性盐完全溶解后放置一段时间，低温离心后，分别收集沉淀和上清液，沉淀保存备用，上清液继续加入中性盐至饱和度40％，中性盐完全溶解后放置一段时间，低温离心后，分别收集沉淀和上清液，沉淀保存备用，上清液继续加入中性盐至饱和度60％，中性盐完全溶解后放置一段时间，低温离心后，分别收集沉淀和上清液，沉淀保存备用，上清液继续加入中性盐至饱和度80％，中性盐完全溶解后放置一段时间，低温离心后，分别收集沉淀和上清液，沉淀保存备用，上清液继续加入中性盐至饱和度100％，中性盐完全溶解后放置一段时间，低温离心后，分别收集沉淀保存备用；

离子交换层析方法的步骤如下：

将昆虫血淋巴收集液，按从昆虫血淋巴收集液分离纯化酚氧化酶原激活系统活性组分技术的特征要求，用酸性溶液或碱性溶液调pH至要求条件范围内并置于特征要求的温度，优选0℃-10℃；将样品溶液上样于预先用缓冲液平衡好的离子交换层析，先用缓冲液充分洗涤去除不吸附的杂蛋白，洗脱方式，采用盐浓度阶段方式，分别用0.1mol/L、0.2mol/L、0.5mol/L、1mol/L、2mol/L、3mol/L盐溶液进行阶段洗脱；也可以采用盐浓度梯度方式，梯度从0.00mol/L-3mol/L；离子交换层析分离纯化中：(1)层析介质选择阳离子交换层析添料，选自CM-离子交换层析添料或SP-离子交换层析添料或S-离子交换层析添料，此时缓冲液酸碱度选择在pH2-pH7；(2)层析介质选择阴离子交换层析添料，选自Q-离子交换层析添料或DEAE-离子交换层析添料或QAE-离子交换层析添料，此时缓冲液酸碱度选择在pH7-pH12；(3)洗脱的盐溶液可以选择规定浓度的缓冲液或在缓冲液中加中性盐到需要的浓度；(4)中性盐选择(NH₄)₂SO₄Na₂SO₄或NaCl或KCl，优选NaCl；

疏水层析方法的步骤如下：

将昆虫血淋巴收集液，按从昆虫血淋巴收集液分离纯化酚氧化酶原激活系统活性组分技术的特征要求，用酸性溶液或碱性溶液调pH至要求条件范围内并置于特征要求的温度，优选0℃-10℃；样品溶液中加入中性盐至3mol/L浓度，上样于预先用缓冲液平衡好的疏水层析，先用缓冲液充分洗涤去除不吸附的杂蛋白，洗脱方式，采用盐浓度阶段方式，分别采用2.5mol/L、2.0mol/L、1.5mol/L、1.0mol/L、0.5mol/L、0.25mol/L、0.2mol/L、0.1mol/L、0.0mol/L中性盐溶液进行阶段洗脱；也可以采用盐浓度梯度方式，梯度从3mol/L-0.0mol/L；疏水层析分离纯化中：(1)疏水层析介质选择苯基-疏水层析添料、正辛烷-疏水层析添料、己烷-疏水层析添料、丁烷-疏水层析添料；(2)中性盐选择(NH₄)₂SO₄或Na₂SO₄或NaCl，优选(NH₄)₂SO₄；(3)洗脱的盐溶液可以选择规定浓度的缓冲液或在缓冲液中加中性盐到需要的浓度；

凝胶过滤层析方法的步骤如下：

将昆虫血淋巴收集液，按从昆虫血淋巴收集液分离纯化酚氧化酶原激活系统活性组分技术的特征要求，用酸性溶液或碱性溶液调pH至要求条件范围内并置于特征要求的温度，优选0℃-10℃；样品液上样于预先用缓冲液平衡好的凝胶过滤层析柱并进行分离纯化洗脱，；洗脱方式，采用与上样缓冲溶液相同的溶液进行洗脱；凝胶层析分离纯化中：(1)层析介质可以选择Sephacryl S-100 HR、Sephacryl S-200 HR、Sephadex G-50、Sephadex G-75、Sephadex G-100、Sephadex G-150或Superose 12 prep grade、Superose 6 prep grade、Superdex 30 prep grade、Superdex 75 prep grade、Superose 12 HR、Superose 6 HR、Superdex Peptide、或Superdex 75 HR、Superdex Peptide PE等凝胶层析添料；(2)洗脱液的离子浓度为0-1.5M，优选0.15M-0.8M。