[发明专利]一种荧光素标记核苷酸的制备方法

权利要求书

1.一种荧光素标记核甘酸的制备方法，具体涉及一种罗得明标记脱氧尿嘧啶核苷三磷酸(Rhodamine-dUTP)的制备方法，主要包括以下步骤：溶液A配制、溶液B配制、偶合、层析；偶合包含反应开始、反应终止、缓冲稳定和浓度调节。

2.根据权利要求1所述一种荧光素标记核甘酸的制备方法，其特征在于，将10-30mmol/L(毫摩尔)的丙烯胺-dUTP原溶液、0.1-0.3mmol/L的NaHCO₃缓冲溶液加入溶液A配制罐(1)中，制得溶液A；将与丙烯胺-dUTP相同摩尔量的罗丹明B(Rhodamine)在溶液B配制罐(2)中，溶解于DMSO(二甲基二砜)中制得溶液B。

3.根据权利要求1所述一种荧光素标记核甘酸的制备方法，其特征在于，使溶液A与溶液B在室温下进入偶合反应开始阶段(3)，进行偶合反应2.5-4.5小时；之后加入0.1-0.3n 2mol/L的甘氨酸(pH 7.0-9.0，溶液终浓度为10-30mmol/L)使偶合反应终止阶段(4)；反应终止后，加入0.3-0.5n 1mol/LTris-HCl缓冲液(三羟甲基氨基甲烷与盐酸混合而得)，pH7.0-9.0(溶液终浓度为10-30mmol/L)，是偶合反应液进入缓冲稳定阶段(5)；再加入10-30n的水，进行偶合混合液的调节浓度阶段(6)，使得dUTP溶液的终浓度为0.5-1.5mmol/L。

4.根据权利要求1所述一种荧光素标记核甘酸的制备方法，其特征在于，将偶合反应混合物加入层析柱(7)，去除未标记的罗丹明B和dUTP，收集纯化的Rhodamine-dUTP。