[发明专利]一种卤代修饰胞苷素的制备方法

权利要求书

1.一种卤代修饰胞苷素的制备方法，其制备方法包括：

（1）以不吸水链霉菌为出发菌，在培养基中发酵培养，

（2）分离、纯化发酵液，

（3）发酵产物经分离纯化后通过FeCl₃配位催化卤代反应进行化学修饰得到侧链为-C₄H₈ClO₉的氮取代胞苷素；

所述的菌株：以吸水链霉菌海南变种S101菌株经自然分离后获得的S510菌株为出发菌株；

所述的培养基为：玉米粉15～25g、豆饼粉20～35g、葡萄糖15～25g、淀粉8～12g、氯化铵1～5g、碳酸钙1～5g，硫酸镁0.1～0.5g，硫酸亚铁0.1～0.5g，氯化钠0.1～0.5g，磷酸氢二钠0.1～0.5g，加自来水至1000mL；

所述的发酵培养的条件为：摇床震荡培养发酵，发酵温度：25～35℃，罐压0.01～0.15MPa，通气量1:0.5～1，发酵时间50～100h；

所述的发酵产物分离和纯化为：发酵液萃取，用Sephadex G-25柱层析，水洗脱，洗脱液经HPLC检测后（COSMOSILC18Econopak柱，流动相0.03三氟醋酸水溶液，流速0.4mL/min，紫外检测波长220nm），将其中保留时间约为5.5min的主要组分含量在75～85％和60～75％的部分分别合并，再经真空冷冻干燥后即可得到初次分离物。含量在60～75％的初提物再经一次常压柱层析，即可将纯度提高到80～85％，合并两次所得的含量在75％以上的样品，用HPLC半制备柱进行制备，最后可得到纯度为90.12％的精品。将精品溶液冷干后，所得微黄色粉末即为侧链-C₄H₉O₉的氮取代胞苷素；效价测定：管碟法；

所述的化学修饰是以KCl为原料，以正丁醇为溶剂。