[发明专利]一种卤代修饰胞苷素的制备方法

说明书

技术领域：

本发明属于微生物农药技术领域，涉及一种卤代修饰胞苷素的制备方法。

背景技术：

农用抗生素（agricultural antibiotics），简称农抗，是指由微生物发酵产生、具有农药功能、用于农业上防治病虫草鼠等有害生物的次生代谢产物。与一般化学合成农药相比，农用抗生素具有以下特点：①结构复杂；②活性高、用量小、选择性好；③易被生物或自然因素所分解，不在环境中积累或残留；④生产原料为淀粉、糖类等农产品，属于再生性能源；⑤采用发酵工程生产，同一套设备只要改变菌种即可生产不同的抗生素，生产菌大多是土壤中的放线菌，也有真菌和细菌。

核苷类抗生素为一类重要的抗生素，它们是一大类对核苷和核苷酸结构修饰的化合物，以核苷为其共同的母核，有抗细菌、抗真菌、抗锥虫、抗肿瘤、锄草、杀虫、增强免疫力等较广范围的生物活性。不同的核苷类抗生素的差异在于母核以外的侧链基团。农业上应用的核苷类抗生素主要有杀稻瘟菌素S（Blasticidin S）和多氧霉素（Polyoxins）。修饰胞苷素为侧链为-C₄H₈ClO₉的氮取代胞苷素。

迄今为止，已经从各种生物（包括细菌、真菌、各类植物）中分离出3800多种卤化物，约95％的卤化物为氯化和溴化物，氟化和碘化物很少，少数化合物既含氯也含碘。许多卤化物，如氯霉素（chloramphenicol）、7-氯四环素（7-chlotetracycline）、万古霉素（vancomycin）等都是重要的抗生素。虽然卤素原子的类型、数量以及位置对化合物生物活性的影响没有特定的规律，但是某些卤化物与相应的非卤化物相比，卤化可以增强其生物活性。如，2-氯硝吡咯菌素的抗真菌活性只有硝吡咯菌素（含有两个氯原子）的10％；与其含氯衍生物相比，不含氯的蝴蝶霉素没有抗菌活性。

发明内容：

本发明的目的是提供一种卤代修饰胞苷素的制备方法。

本发明通过下述方法实现的：一种卤代修饰胞苷素的制备方法，1、一种卤代修饰胞苷素的制备方法，

（1）以不吸水链霉菌为出发菌，在培养基中发酵培养，

（2）分离、纯化发酵液，

（3）发酵产物经分离纯化后通过FeCl₃配位催化卤代反应进行化学修饰得到侧链为-C₄H₈ClO₉的氮取代胞苷素；

菌株：以吸水链霉菌海南变种S101菌株经自然分离后获得的S510菌株为出发菌株。

培养基：玉米粉15～25g、豆饼粉20～35g、葡萄糖15～25g、淀粉8～12g、氯化铵1～5g、碳酸钙1～5g，硫酸镁0.1～0.5，硫酸亚铁0.1～0.5，氯化钠0.1～0.5g，磷酸氢二钠0.1～0.5g，加自来水至1000mL。经121℃高压湿热灭菌20min。

发酵培养：摇床震荡培养，转速为150～250转/分钟，发酵温度：25～35℃，罐压0.01～0.15MPa，通气量1:0.5～1，发酵时间50～100h。

发酵产物分离和纯化：发酵液萃取，用Sephadex G-25柱层析，水洗脱，洗脱液经HPLC检测后（COSMOSILC18Econopak柱，流动相0.03三氟醋酸水溶液，流速0.4mL/min，紫外检测波长220nm），将其中保留时间约为5.5min的主要组分含量在75～85％和60～75％的部分分别合并，再经真空冷冻干燥后即可得到初次分离物。含量在60～75％的初提物再经一次常压柱层析，即可将纯度提高到80～85％，合并两次所得的含量在75％以上的样品，用HPLC半制备柱进行制备，最后可得到纯度为90.12％的精品。将精品溶液冷干后，所得微黄色粉末即为侧链-C₄H₉O₉的氮取代胞苷素。效价测定：管碟法。

化学修饰：发酵产物分离纯化后和KCl反应，以正丁醇为溶剂，FeCl₃为催化剂，通过配位催化卤代反应来制备带侧链-C₄H₈ClO₉的氮取代胞苷素。效价测定：管碟法。