[发明专利]一种检测CLLU1基因mRNA表达量的试剂盒

权利要求书

1.一种检测CLLU1基因mRNA表达量的试剂盒，包含检测用引物、荧光探针、cDNA第一链合成试剂、荧光定量PCR混合液、阴性对照和阳性对照，其特征在于，所述检测用引物、荧光探针包括CLLU1基因引物、内参基因ABL引物及Taqman荧光探针，其中：

CLLU1基因上游引物序列如序列表中SEQ ID NO:1所示；

CLLU1基因下游引物序列如序列表中SEQ ID NO:2所示；

CLLU1基因Taqman荧光探针如序列表中SEQ ID NO:3所示；

ABL基因上游引物序列如序列表中SEQ ID NO:4所示；

ABL基因下游引物序列如序列表中SEQ ID NO:5所示；

ABL基因Taqman荧光探针如序列表中SEQ ID NO:6所示；

所述cDNA第一链合成试剂含有MgC1₂、逆转录酶缓冲液、dNTPs、RNA酶抑制剂、Oligo(dT)₁₅、AMV逆转录酶和无RNase去离子水；所述荧光定量PCR混合液含有PCR预混合液、Mg²⁺、dNTPs、dUTP、Taq酶、UNG酶和无RNase去离子水。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括内部阳性控制序列、内部阳性控制序列的引物和Taqman荧光探针，其中：内部阳性控制序列如序列表中SEQ IDNO:7所示；内部阳性控制序列的上游引物如序列表中SEQ ID NO:8所示；内部阳性控制序列的下游引物如序列表中SEQ ID NO:9所示；内部阳性控制序列的Taqman荧光探针如序列表中SEQ ID NO:10所示。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述CLLU1基因的Taqman荧光探针和ABL基因的Taqman荧光探针的5’端连接有荧光报告基团FAM，3’端均连接有荧光淬灭基团TAMRA；所述内部阳性控制序列的Taqman荧光探针的5’端连接有荧光报告基团TET，3’端连接有荧光淬灭基团TAMRA。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述内参基因ABL的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:11所示。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述阴性对照为去离子水；所述阳性对照为含有CLLU1基因的总RNA样品。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述cDNA第一链合成试剂为：25mmol/LMgC1₂ 4μL，10×逆转录酶缓冲液2μL，10mmol/L dNTP 2μL，RNA酶抑制剂0.5μL，Oligo(dT)₁₅ 0.5μg，AMV逆转录酶1.5U和无RNase去离子水，总体积11μL。

7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光定量PCR的混合液为：1×的PCR预混合液、2.5-4.0mM的Mg²⁺、0.2-0.4mM的dNTPs、0.3-0.6mM的dUTP、0.2U/μL的Taq酶、0.01-0.05U/μL的UNG酶和无RNase去离子水。